Chương 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN
3.4 Tính kháng khuẩn của thực vật
Hợp chất thứ cấp thô từ thực vật được chiết bằng methanol và để khô đến cắn.
Hòa tan cắn bằng methanol với nồng độ methanol thấp. Dùng phương pháp khuếch tán thạch giếng hay khuếch tán thạch đĩa để kiểm tra tính kháng khuẩn của dịch chiết thô thực vật.
Phương pháp khuếch tán thạch giếng chỉ khác một điểm duy nhất là có đục lỗ giếng trên mặt thạch so với phương pháp khuếch tán thạch đĩa. Đục giếng trên mặt thạch có ưu điểm là giới hạn mẫu thử trong thể tích giếng, hạn chế tối đa tác dụng của dung môi hữu cơ hòa tan mẫu thử và dễ dàng thao tác. Bênh cạnh đó, nhược điểm của phương pháp có đục giếng là kết quả có thể bị ảnh hưởng bởi dụng cụ tạo giếng, tức là khi tạo giếng phải hơ lửa đầu tròn dụng cụ, nếu để chưa nguội thì dụng cụ tạo giếng có thể giếng chết vi khuẩn chỉ thị khi thao tác; khó xác định kết quả với nồng độ mẫu thử ít. Với phương pháp không đục giếng, vì trực tiếp đặt mẫu thử lên mặt thạch nên sự khuếch tán của các chất có tác dụng giết vi khuẩn có thể có hiệu quả hơn; tuy nhiên cũng có bất lợi là kết quả dễ bị ảnh hưởng bởi dung môi hữu cơ hòa tan mẫu. Để hạn chế nhược điểm của cả hai phương pháp, cần cẩn thận khi thao tác với que tạo giếng và quá trình ngâm tẩm giấy lọc vào dịch mẫu thử, cần để ráo dịch lỏng trước khi đặt mẫu thử lên mặt thạch hay vào giếng. Thời gian mẫu thử khuếch tán ra đĩa thạch cũng là lúc vi khuẩn chỉ thị tăng sinh. Nếu mẫu thử có chứa hoạt chất ức chế vi khuẩn thì vi khuẩn không thể mọc được trên phần chất khuếch tán, do đó tạo vòng vô khuẩn ta có thể quan sát được.
Nguyên liệu được khảo sát có khối lượng khô từ 2,9-4,3g, cắn được hòa tan với methanol 20% để khảo sát tính kháng khuẩn.
Bảng 3.3: Kết quả thử hoạt tính kháng khuẩn:
Đường kính vòng vô khuẩn (mm)
Gram (+) Gram (-)
St
t Mẫu nguyên liệu
SA MRSA SF PA E.coli
1 Bù ngót 9,5 9 - - -
2 Xùm sụp 7 - - - -
3 Thơm - 11 - - -
4 Đu đủ 9,8 10 - - -
5 Anh đào 17,5 12,5 20 - -
6 Dứa 13 9,5 15 - -
7 Thanh long 15,5 11,5 14 - -
8 Lốt 11 12 - - -
9 Dừa cạn 9,2 10,5 14,5 - 8
10 Dâm bụt 10,3 11,3 14,3 - 11,2
11 Sống đời 15 11,3 - - 12,8
12 Xoan - 12 - - 9,6
13 Diệp hạ châu 20 17 15,5 11,5 18
14 Đinh lăng 8,5 - 10 - 9,5
15 Cải xoong - - - - -
16 Hoàn ngọc - - - - -
17 Bồ công anh VN - 9,6 - - 8
18 Khế - - - - -
19 Bạch hoa xà - - - - -
20 Bù xích - - - - -
SA: Staphylococcus aureus, SF: Streptococcus faecalis, PA: Pseudomonas aeruginosa
(Chứng âm có đường kính 6mm.)
d)
b) c)
a) Cây Dừa cạn
Ảnh 3.2: Tính kháng khuẩn của cây dừa cạn
a) MRSA, b) Streptococcus faecalis, c) Staphylococcus aureus, d) E.coli, thang 10mm Cây Dừa cạn có tính kháng với các chủng vi khuẩn Gram dương. Ảnh 3.2 cho thấy dịch chiết thô của dừa cạn tạo vòng vô khuẩn trên đĩa thạch các chủng Gram dương dùng trong thực nghiệm, chứng âm là giấy thấm màu trắng không gây tác động kháng khuẩn.
Cây Dừa cạn đã được nghiên cứu về tác dụng y học từ những năm 1970, với tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm, trị ung thư, thông tiểu... Hoạt tính của cây Dừa cạn chủ yếu là do thành phần alkaloid Vinblastin và Vincristin là những chất ức chế mạnh sự phân bào [27]. Dịch chiết cây Dừa cạn ức chế được vi khuẩn Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium, Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa [12] nhưng thực nghiệm lại không ức chế được Pseudomonas aeruginosa. Điều này có thể giải thích do thao tác thí nghiệm, và việc chọn môi trường NA cho thí nghiệm ảnh hưởng đến việc quan sát kết quả. Mặt khác, điều kiện thổ nhưỡng của địa phương nơi thu hái lá cây Dừa cạn sử dụng trong nghiên cứu có ảnh hưởng sâu sắc đến thành phần hợp chất thứ cấp [7].
a)
Cây Dâm bụt
Ảnh 3.3: Tính kháng khuẩn của cây Dâm bụt
a) MRSA, b) Streptococcus faecalis, c) E.coli,d) Staphylococcus aureus, Thang 10mm
Ảnh 3.3 cho thấy hoạt tính kháng vi khuẩn của dịch chiết cây Dâm bụt. Cây Dâm bụt có thể kháng vi khuẩn Gram dương và Gram âm. Theo dân gian, Dâm bụt có thể chữa u nhọt, người ta lấy đọt Dâm bụt giã nát và đắp vào khối u nhọt trên người, vài ngày sau sẽ khỏi.
Theo kết quả báo cáo trên Herbal Tech Industry (11/2010), lá và hoa cây Dâm bụt đều có tính kháng khuẩn, các chủng vi sinh được thử nghiệm trong báo cáo này gồm Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, E.coli, Pseudomonas aeruginosa thì dịch chiết nước nóng từ lá và hoa Dâm bụt đều có tính kháng Staphylococcus aureus, E.coli và Pseudomonas aeruginosa. Với dịch chiết methanol thì dịch chiết lá kháng được Staphylococcus aureus và E.coli, không kháng được Pseudomonas aeruginosab [16]. Như vậy, kết quả thực nghiệm của chúng tôi tương đồng với báo cáo.
Cây Bù ngót
Ảnh 3.4: Tính kháng khuẩn của cây Bù ngót a) Staphylococcus aureus, b) MRSA, Thang 10mm
Cây Bù ngót có khả năng kháng chủng Staphylococcus aureus và chủng kháng kháng sinh MRSA, tuy nhiên khả năng kháng chủng MRSA yếu, thể hiện qua một vòng vô khuẩn mờ quanh miếng giấy tẩm dịch chiết.
Theo nghiên cứu của Pajaree Tongngok và Kornchanok Kaenkum (6/2005, Thái Lan) thì dịch chiết methanol lá Bù ngót có khả năng ức chế E.coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa chỉ ở nồng độ 5mg/đĩa nhưng kết quả cũng không rõ ràng [11]. Như vậy, khả năng ức chế 2 chủng Gram âm trong đề tài này không được ghi nhận với cây Bù ngót, có thể do nồng độ mẫu thử nhỏ nên chưa thể xác định.
Sống đời
Ảnh 3.5: Tính kháng khuẩn của cây Sống đời
a) E.coli, b) MRSA, c) Staphylococcus aureus, Thang 10mm
Ảnh 3.5 cho thấy dịch chiết cây sống đời kháng được chủng Gram dương và Gram âm.
Theo trang Philippine Medicinal Plants [28] thì dịch chiết lá cây Sống đời có tác dụng chống lại hầu hết các vi sinh vật ngoại trừ Candida albican. Dịch chiết methanol có hoạt tính chống lại Sta. aureus, E. faecalis, B. subtilis và Ps. aeruginosa [28]. Cũng theo nhiều tài liệu thì lá Sống đời có tác dụng kháng khuẩn nên nó được dùng trị một số bệnh đường ruột và các bệnh nhiễm trùng [29], trị bỏng và trị mụn nhọt [30]. Điều này cho thấy kết quả thực nghiệm sai sót có thể do nồng độ mẫu thử nhỏ, hay khuẩn lạc mọc yếu trên môi trường NA nên khó quan sát.
Bồ công anh Việt Nam
Ảnh 3.6: Tính kháng khuẩn của Bồ công anh Việt Nam a) E.coli, b) MRSA, Thang 10mm
Thực nghiệm cho thấy Bồ công anh Việt Nam có tính kháng E.coli và MRSA nhưng không thấy vòng vô khuẩn đối với các chủng khác.
Hiện tại thì chưa thấy có báo cáo nghiên cứu nào nói về tính kháng khuẩn của Bồ công anh Việt Nam, nhưng theo y học dân gian thì Bồ công anh được dùng làm thuốc chữa bệnh mụn nhọt, đau dạ dày hay kém tiêu hóa [31].
Lá lốt
Ảnh 3.7: Tính kháng khuẩn của lá Lốt.
a) Staphylococcus aureus, b) MRSA
Ảnh 3.7 cho thấy vòng vô khuẩn xuất hiện rõ ràng với chủng Sta. aureus và chủng kháng kháng sinh MRSA nhưng không thấy có vòng vô khuẩn với các chủng vi khuẩn khác.
d)
Theo nghiên cứu Ingelia White, Oshima và Nelly D. Leswara (2007) thì toàn cây Lá lốt sau khi được nghiền với methanol thì có tác dụng kháng Candida albicans, E.coli và Sta.aureus ở nồng độ 125mg/ml và 250mg/ml [33]. Thực nghiệm không thấy ức chế được E.coli có thể do nồng độ mẫu thử đem khảo sát thấp hay trong quá trình xử lý nguyên liệu, một số hợp chất thứ cấp có hoạt tính kháng khuẩn đã bị phân hủy, hơn nữa đề tài chỉ dùng lá để khảo sát nên cũng không thể đánh giá so sánh được.
Cây Diệp hạ châu
Ảnh 3.8: Tính kháng khuẩn của Diệp hạ châu
a) Staphylococcus aureus, b) MRSA, c) Streptococcus faecalis, d) Pseudomonas aeruginosa, e) E.coli, Thang 10mm
Diệp hạ châu có tác dụng kháng cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm, ảnh 3.8 cho thấy kết quả kháng tụ cầu khuẩn vàng là rõ nhất, 3 hình còn lại khuẩn lạc mọc yếu nhưng vẫn ghi nhận được kết quả.
Theo nhiều nghiên cứu thì Diệp hạ châu kháng được các chủng vi khuẩn như S aureus, Klebsiella Spp, E.coli, Pseudomonas Spp, Pseudomonas aeruginosa [4] và Salmonella typhi [10].
Như vậy, theo kết quả, với hơn 20 loài thực vật khảo sát tính kháng khuẩn, loài thực vật có thể ức chế được 5 chủng vi khuẩn chỉ có cây Diệp hạ châu. Dịch chiết thô cây Diệp hạ châu được sử dụng trong thí nghiệm thử MIC và tiếp tục tiến hành tách chiết phân nhóm hợp chất thứ cấp để kiểm tra nhóm chất nào có tác dụng kháng khuẩn.