Kiểm tra tính kháng khuẩn là một phương pháp đánh giá dược lý của thực vật.
Dược lý, về cơ bản là tác dụng của các hợp chất thứ cấp hiện diện trong thực vật, không phải là một chất duy nhất mà là sự kết hợp của nhiều chất (Parekh và cộng sự,
2005) [5]. Có nhiều phương pháp kiểm tra tính kháng khuẩn, mà tùy vào nhà nghiên cứu, sự chọn lựa mà có kết quả khác nhau.
Phương pháp khuếch tán đĩa thạch (agar disk diffusion assay).
Là phương pháp kiểm tra tính kháng khuẩn được phát triển từ 1940 (Heatley, 1944). Tiến trình được “National Committee for Clinical Laboratory Standards” chấp nhận và được sử dụng rộng rãi cho đến nay, được mô tả bởi Bauer, Kirby, Sherris và Truck (còn được gọi là phương pháp Kirby-Bauer). Phương pháp này được sử dụng rộng rãi để xác định tính kháng khuẩn của dịch chiết thực vật. Trong phương pháp này,
giấy lọc tiệt trùng 6mm được bão hòa với dịch chiết thực vật ở nồng độ mong muốn. Các miếng giấy ngâm tẩm này được đặt lên môi trường thạch rắn thích hợp như
Mueller Hinton (Mueller và Hinton, 1941), Trypton Soy agar (Louren và cộng sự, 2004) hay Nutrient agar (Doughari, 2006). Môi trường được tiệt trùng trước khi tiến hành kiểm tra trên vi khuẩn. Mật độ vi sinh chỉ thị là 108 CFU/ml trên một đĩa thạch (Baris và cộng sự, 2006) được xác định bằng mật độ quang của dịch nuôi cấy qua đêm có độ đục bằng ống McFarland 0,5. Đĩa sau đó được ủ ở 24 giờ, 370C hoặc 48 giờ, 250C (nấm) (Salie và cộng sự, 1996; Baris và cộng sự, 2006). Sau khi ủ, đường kính vòng vô trùng được đo bằng mm, giảm 80% tỷ lệ phát triển [5].
Ảnh 1.1: Vòng vô khuẩn
Phương pháp khuếch tán thạch giếng (agar well diffusion assay).
Nguyên tắc của phương pháp này giống như của phương pháp khuếch tán đĩa
định nồng độ chất cần kiểm tra, sau đó đem ủở điều kiện thích hợp với vi sinh vật chỉ
thị (Mbata và cộng sự, 2006; Norrel và Messely, 1997) [5].
Phương pháp pha loãng micro (broth microtitre)
Phương pháp pha loãng micro hay phương pháp độ chuẩn micro, là phương
pháp rất hữu ích dùng xác định MIC của lượng lớn mẫu thử. Minimum Inhibitory Concentrations trong vi sinh là nồng độ thấp nhất của chất kháng khuẩn có khả năng ức chế sự phát triển của vi sinh vật sau khi ủ qua đêm. Trong phương pháp này, chất
được kiểm tra được hòa trong dung môi hay DMSO. Pha loãng mẫu giảm dần hai lần với nước hay môi trường Mueller Hinton rồi nuôi vi sinh vật chỉ thị với nồng độ 1x106 CFU/ml. Ủ đĩa thạch thử nghiệm ở 370C trong 24 giờ. Sau khi ủ qua đêm, xác định khả năng ức chế sự phát triển của vi sinh vật [5].
Phương pháp pha loãng macro (Broth macrodilution assay)
Về nguyên tắc thì phương pháp pha loãng macro giống với phương pháp pha
loãng micro, nhưng được tiến hành trên các ống. Một bộống nghiệm chứa các nồng độ
khác nhau của dịch chiết thực vật, thêm lượng vi sinh vật chỉ thị. Sau khi ủ, ống được kiểm tra sự tăng trưởng bằng cách đo độ đục ở bước sóng 620nm [5].