b. Phương pháp cấy nấm mốc
1.2 PHÂN TÍCH PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BRADFORD
1.2.1 Nguyên tắc
Hàm lượng protein được xác định dựa trên phản ứng tạo màu giữa protein có trong dung dịch với thuốc thử Coomassie Brilliant Blue. Cường độ màu của hỗn họp phản ứng ở bước sóng 595nm tỷ lệ thuận với hàm lượng protein trong một phạm vi nhất định. Biết được mật độ quang của dung dịch protein nghiên cứu với thuốc thử Coomassie Brilliant Blue, dựa vào đường chuẩn của protein tinh khiết Bovine Serum Albumin (BSA) với thuốc thử này tính được lượng protein của mẫu nghiên cứu.
1.2.2 Tiến hành thí nghiệm
1.2.2.1 Chuẩn bị hoá chất
Chuẩn bị thuốc thử bằng cách hoà tan lOOmg Coomassie Brilliant Blue G - Tyrosi ne (gmol/ ml) 0 0,1 0,2 0,3 40, 0,6 0,8 1,0 1,2 OD (280n m) 0 0,128 0,225 0,363 0,467 0,692 0,920 1,124 1,328 Từ kết quả đo OD, ta thiết lập được mối quan hệ giữa độ hấp thụ và nồng độ Tyrosine trong dung dịch.
Hình 1: đưòmg chuẩn Tyrosine
250 vào trong 50ml ethanol (96%, v/v). Sau đó thêm vào 100ml H3PO4 (85%, w/v) và dẫn nước cất đến 1 lít.
1.2.2.2 Các bước tiến hành thí nghiệm
Bật máy Spectrophotometer và cho khởi động ít nhất 10 phút.
Dùng micropippet lấy chính xác 20|il mẫu cho vào cuvette nhựa loại lml. Thêm vào lml thuốc nhuộm màu, trộn đều và ủ ở nhiệt độ phòng trong thời gian 15 phút.
Đo độ hấp thụ ở bước sóng 595nm. Đối chiếu với đường chuân ta xác định được hàm lượng protein có trong mẫu.
- Xây dựng đường chuẩn protein
Chuẩn bị dãy ống nghiệm chứa dung dịch BSA chuẩn với nồng độ tăng dần từ 0,03; 0,12; 0,18; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 và lmg/ml. Tiến hành xác định hàm lượng protein của các dung dịch nói trên bằng phương pháp Bradford. Thí nghiệm lặp lại 3 lần.
Ghi nhận giá trị OD của các dung dịch nói trên ở bước sóng 595nm.
BSA OD 0,03 0,030 0,12 0,101 0,18 0,123 0,3 0,180 0,4 0,279 0,5 0,374 0,6 0,454 0,7 0,528 0,8 0,588 0,9 0,631 1 0,700
Từ kết quả đo OD, ta thiết lập được mối quan hệ giữa độ hấp thụ và nồng độ BSA trong dung dịch
Nồng độ BSA
PHỤ LỤC 2: KÉT QUẢ THỐNG KÊ