2. Mục ựắch của ựề tài
2.5.4 Phương pháp kiểmtra các chỉ tiêu an toàn theo phương pháp phân lô, phân ựàn
phân ựàn
Dựa vào quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vắc xin dùng trong Thú y của Cục Thú y (1994)[4] , chúng tôi ựã tiến hành theo cách sau:
* Phương pháp thay thế:
Chọn 20 chuột bạch, trọng lượng 18 Ờ 20 gram, khỏe mạnh, không có kháng thể E.coli tương ứng, chia làm 2 lô:
- Lô thắ nghiệm: Gồm 10 chuột, mỗi con ựược tiêm 0.5 ml vắc xin (liều gấp 2 lần liều miễn dịch).
- Lô ựối chứng: 10 chuột không tiêm vắc xin.
Vắc xin ựạt chỉ tiêu an toàn khi cả 2 lô chuột ựược theo dõi ắt nhất 10 ngày, không có bất cứ phản ứng bất thường nào ở vị trắ tiêm hoặc triệu chứng lâm sàng của bệnh do vắc xin gây ra.
* Phương pháp thử trên bản ựộng vật:
Chọn 60 lợn khỏe mạnh, lứa tuổi 2, 4 và 6 tuần tuổi chia làm 2 lô: - Lô 1: Mỗi lứa tuổi của lợn chọn 10 con, tiêm 2ml/ con/lứa tuổi.
- Lô 2: Mỗi lứa tuổi của lợn chọn 10 con, sau ựó tiêm 3ml/ con/lứa tuổi. Theo dõi phản ứng sau khi tiêm ắt nhất 10 ngày, vắc xin ựạt chỉ tiêu an toàn khi không có phản ứng bất thường nào trên ựộng vật thắ nghiệm trong thời gian theo dõi.
2.5.5 Phương pháp kiểm tra hiệu lực.
Dựa vào Ộhồ sơ ựăng ký sản xuất vắc xin E.coli phù ựầu lợnỢ[16] ựược Cục Thú y cấp phép 3/2003 lưu giữ tại ựơn vị về việc kiểm nghiệm hiệu lực của vắc xin phù ựầu, chúng tôi ựã tiến hành theo cách sau:
Vắc xin ựược kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp:
* Kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp công cường ựộc trên ựộng vật thắ nghiệm:
- Lô thắ nghiệm: Mỗi lô vắc xin chọn 10 chuột khỏe mạnh, không có kháng thể tương ứng trong máu. Mỗi con tiêm 0.2 ml vắc xin vào dưới da.
- Lô ựối chứng: 10 chuột không tiêm vắc xin.
Sau 21 ngày tiến hành công cường ựộc với liều 10LD50, toàn bộ chuột ựược theo dõi 10 ngày. Phải có 70 - 90% số chuột lô thắ nghiệm ựược bảo hộ,
trong khi ựó lô dối chứng chuột chết 100% trong vòng 24- 48 giờ và ựều phân lập ựược vi khuẩn E.coli từ máu tim chuột chết.
* Kiểm tra hiệu lực bằng phương pháp công cường ựộc trên bản ựộng vật:
Chọn 20 lợn khỏe mạnh, trọng lượng từ 10 -15 kg. Lợn ựược chia làm 4 lô bao gồm:
- 3 lô thắ nghiệm( lô 1, 2, 3): Tiêm phòng bảo hộ miễn dịch, mỗi lô 5 con, lợn ở mỗi lô ựược tiêm phòng vắc xin với liều 1 ml/con ( mỗi ml vắc xin chứa 4- 4.5 tỷ vi khuẩn).
- Lô ựối chứng (lô 4): Không tiêm phòng vắc xin.
Tất cả nuôi dưỡng chăm sóc sau 21 ngày tiến hành công cường ựộc, toàn bộ các lô ựược tiêm với liều 4x109 - 6x109 vi khuẩn. Theo dõi trong 10 ngày.