VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1 Nguyên liệu và thiết bị.
Khóa luận đã sử dụng một số hóa chất, dung môi và thiết bị của phòng thí nghiệm Tổng hợp Hóa Dược – Bộ môn Công Nghiệp Dược – Trường Đại học Dược Hà Nội.
2.1.1 Hóa chất và dung môi
Bảng 2.1 Danh mục các dung môi, hóa chất
STT Dung môi, hóa chất Nguồn gốc
1 Aceton Trung Quốc
2 Aceton nitril Merck-Đức
3 Acid acetic băng Merck-Đức 4 Acid hydrocloric đặc (37%) Trung Quốc 5 Acid hydrobromic Trung Quốc 6 Acid sulfuric Trung Quốc 7 Benzyl clorid Trung Quốc 8 Carbon disulfid Trung Quốc
9 Cloroform Merck-Đức
10 Dicloroethan Trung Quốc
11 Ethanol Trung Quốc
12 Ethyl acetat Trung Quốc 13 Ethyl cloroacetat Trung Quốc 14 Hydrazin hydrat Trung Quốc 15 Kali carbonat khan Trung Quốc 16 Kali hydroxyd Trung Quốc
17 Kali iodid Trung Quốc
18 Natri sulfat khan Trung Quốc
19 n-Butanol Trung Quốc
20 o-phenylendiamin Merck-Đức 21 p-N-acetylamionphenol (paracetamol) Việt Nam 22 Dung dịch amoniac (25%) Việt Nam 23 Tetrahydrofuran Merck-Đức
2.1.2 Thiết bị, dụng cụ đã sử dụng trong thực nghiệm
Bảng 2.2 Danh mục các thiết bị, dụng cụ
STT Tên dụng cụ, thiết bị Xuất xứ
1 Bản mỏng silicagel GF254 Merck-Đức
2 Bếp ôm Hàn Quốc
3 Bình cầu 1 cổ 50mL, 100mL, 250mL Merk-Đức 4 Bình cầu 2 cổ 100mL Merk-Đức 5 Bình chiết 50mL, 100mL, 250mL Trung Quốc
6 Bình sắc ký Trung Quốc
7 Bộ lọc hút chân không Trung Quốc 8 Cân kỹ thuật Sartorius BP 2001S, độ nhạy 10-2 Thụy Sỹ 9 Cốc có mỏ 50mL, 100mL, 250mL Merk-Đức
10 Đèn tử ngoại Merk-Đức
11 Đĩa petri Trung Quốc
13 Giấy lọc Việt Nam
15 Máy cất quay chân không Buchi R210 Thụy Sỹ 16 Máy đo nhiệt độ nóng chảy EZ-Melt Mỹ 17 Máy đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân Bruker AV-500MHz Mỹ 18 Máy đo phổ hồng ngoại GX-Perkin Elmer Mỹ 19 Máy đo phổ khối lượng LC/MS/MS - Xevo TQ Mỹ
20 Máy khuấy từ gia nhiệt IKA Merk-Đức 21 Nhiệt kế thủy ngân Trung Quốc 22 Ống đong 25mL, 50mL Trung Quốc 26 Pipet chia vạch 1mL, 5mL, 10mL Merk-Đức 28 Sinh hàn hồi lưu Merk-Đức
29 Tủ sấy Memmert Merk-Đức (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2.2 Nội dung nghiên cứu
Bảng 2.4. Công thức các chất dự kiến tổng hợp được.
Công thức Danh pháp
2-methyl-1H-benzo[d]imidazol (1)
Ethyl(2-methyl-1H-
benzo[d]imidazol)acetat (2)
2-(2-methyl-1H-benzo[d]imidazol- 1-yl) ethanhydrazid (3)
1-[(2-mercapto-1,3,4-oxadiazol-5- yl)methyl]-2-methyl-1H-
1-[(2-benzylsulfanyl-1,3,4- oxadiazol-5-yl)methyl]-2-methyl-
1H-benzo[d]imidazol (4a)
N-{4-[({2-[(2-methyl-1H- benzo[d]imidazol-1-yl)methyl]-
1,3,4-oxadiazol-5-
yl}sulfanyl)butoxy]phenyl}acetam id (4b)
Kiểm tra độ tinh khiết của 6 chất 1, 2, 3, 4, 4a, 4b bằng SKLM và đo nhiệt độ nóng chảy, xác định cấu trúc các chất 3, 4, 4a, 4b tổng hợp được bằng phổ hồng ngoại IR, phổ khối lượng MS, phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton 1H-NMR.
Thử tác dụng kháng nấm, kháng khuẩn với các chất 3, 4, 4a, 4b.
Thử tác dụng chống ung thư với chất 4a, 4b. 2.3 Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Tổng hợp hóa học và kiểm tra độ tinh khiết
Sử dụng phương pháp tổng hợp hóa học, dựa trên các phản ứng:
1. Phản ứng đóng vòng tạo dẫn chất 2-methyl-1H-benzo[d]imidazol. 2. Phản ứng thế N1 tạo ester ethyl (2-methyl-1H-benzo[d]imidazol)acetat. 3. Phản ứng hydrazid hóa ethyl (2-methyl-1H-benzo[d]imidazol)acetat. 4. Phản ứng đóng vòng tạo dẫn chất 1-[(2-mercapto-1,3,4-oxadiazol-5-yl)]-2-
methyl-1H-benzo[d]imidazol. 5. Phản ứng mở vòng tetrahydrofuran.
6. Phản ứng tách loại hydrobromid từ paracetamol và 1,4-dibrommobutan. 7. Phản ứng S-alkyl hóa 1-[(2-mercapto-1,3,4-oxadiazol-5-yl)]-2-methyl-1H-
benzo[d]imidazol
Dùng sắc ký lớp mỏng để theo dõi tiến triển của phản ứng, hiện màu bằng đèn tử ngoại bước sóng 254nm.
Kiểm tra độ tinh khiết của sản phẩm bằng SKLM. Đo nhiệt độ nóng chảy bằng máy đo nhiệt độ nóng chảy EZ-Melt.
2.3.2 Xác định cấu trúc
Xác định cấu trúc của các chất tổng hợp được dựa trên kết quả phân tích phổ hồng ngoại (IR), phổ khối lượng (MS), phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton (1H- NMR).
Phổ hồng ngoại (IR):
Tại phòng phân tích cấu trúc phân tử Viện hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, các chất 3, 4, 4a, 4b đã được ghi phổ hồng ngoại (IR) trên máy với kỹ thuật viên nén KBr ghi trong vùng 4000-400 cm-1 [1, 3].
Phổ khối lượng (MS) (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tại phòng phân tích khối phổ của Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam các chất 4, 4a, 4b được ghi phổ khối lượng trên máy LC/MS-Xevo TQ với chế độ đo ESI [4].
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR)
Được ghi trên máy Brucker AV-500MHz, tại Viện Hóa Học-Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam, sử dụng dung môi là DMSO [2].
2.3.3 Thử tác dụng sinh học
Thử hoạt tính kháng khuẩn, kháng nấm:
Theo phương pháp khuếch tán trên thạch và sau đó đo kích thước vòng vô khuẩn , thực hiện tại Bộ môn Vi sinh- Sinh học của Trường Đại học Dược Hà Nội.
Thử hoạt tính gây độc tế bào:
Tại Viện Công nghệ Sinh học- Viện Hàn lâm Khoa Học và Công nghệ Việt Nam theo phương pháp của Monk (1991), hiện đang được áp dụng tại Viện nghiên cứu ung thư Quốc gia của Mỹ (NCI- National Cancer Institute).