Quả dừa Ta được xử lí GA3 20 mg/l và sử dụng nước cất ở giai đoạn 0, 7 và 14 ngày sau khi ươm được thu lấy cơm dừa để xác định hàm lượng dầu.
Định lượng dầu bằng phương pháp tách dầu bằng nhiệt
Định lượng dầu trong cơm dừa ở ba giai đoạn 0, 7 và 14 ngày sau khi ươm quả.
Theo dân gian, cơm dừa được nạo bằng bàn nạo. Sau đó trộn cơm dừa đã nạo vào nước ấm rồi vắt lấy nước. Thực hiện nhiều lần để đảm bảo lấy gần hết lượng dầu chứa trong cơm dừa. Nước cốt thu được đem cô cạn trên lửa nhỏ để xác định hàm lượng dầu.
Mỗi giai đoạn lấy cơm dừa của ba trái trộn lại, mỗi lần xử lí 100g trọng lượng tươi. Kết quả là trung bình cộng của ba lần lặp lại với sai số chuẩn.
2.7. Đo hoạt tính các chất điều hòa tăng trưởng thực vật trong nước và chồi dừa Ta dừa Ta
Nước dừa Ta 0 ngày, 7 ngày, 14 ngày sau khi ươm và chồi dừa Ta 7 ngày sau khi ươm được li trích và đo các chất điều hòa tăng trưởng thực vật.
•Ly trích và phân lập
Để ly trích và phân lập các chất điều hòa tăng trưởng thực vật, người ta thay đổi pH của dịch hòa tan và dùng các dung môi thích hợp (ether, butanol bão hòa nước), trước khi áp dụng phương pháp sắc ký.
Các chất điều hòa tăng trưởng thực vật như auxin, cytokinin, gibberellin, acid abscisic dạng tự do được ly trích và phân đoạn theo Bùi Trang Việt (1992).
Đong 100 ml nước dừa hoặc nghiền 3 g chồi dừa tươi, thêm 40 ml metanol 80%, để qua đêm ở nhiệt độ phòng. Sau 24h, lọc, rửa bã 2 lần metanol 80%, mỗi lần 20 ml. Cô cạn dịch lỏng dưới quạt. Thêm 5 ml nước cất vào phần cặn. Dịch lọc được chuẩn trên giấy sắc kí. Sơ đồ ly trích và phân đoạn như hình 2.1.
•Sắc ký
Sắc ký thực hiện trên bản mỏng silicagel 60 F254 (Merck), ở nhiệt độ 30oC. Dung môi là chloroform : metanol : acid acetic (80: 15: 5 theo thể tích). Vị trí chất điều hòa tăng trưởng thực vật trên bản sắc ký được phát hiện nhờ quan sát dưới tia UV ở bước sóng 254 nm.
•Xác định hoạt tính các chất điều hòa tăng trưởng thực vật bằng các sinh trắc nghiệm
Sau sắc ký, các chất điều hòa tăng trưởng thực vật được xác định tương ứng với mỗi băng trên bản silicagel nhờ giá trị Rf của mỗi chất chuẩn. Các ô tương ứng với từng mẫu trên mỗi băng được cắt riêng, cạo, ngâm với nước cất sau 24 giờ, được dùng trong sinh trắc nghiệm.
Sinh trắc nghiệm auxin và acid abscisic
Hoạt tính auxin và acid abcisic được xác định nhờ sinh trắc nghiệm diệp tiêu lúa (Oryza sativa L.) (Bùi Trang Việt 1992). Hột lúa được cho nẩy mầm trong tối. Sau 80 giờ, diệp tiêu (chưa bị xé) được cô lập được cắt thành đoạn dài 2mm để dùng trong sinh trắc nghiệm. Mỗi nghiệm thức gồm 10 khúc cắt diệp tiêu. Sự gia tăng chiều dài của diệp tiêu được đo sau 24h, trong tối, nhiệt độ 30 ± 1oC. Hoạt tính của auxin và acid abcisic lần lượt tỉ lệ thuận và nghịch với sự sai biệt chiều dài diệp tiêu so với đối chứng (dung dịch được tạo bằng cách cạo ngâm phần silicagel không có chất trích đi qua) và được tính bằng cách so sánh sai biệt chiều dài của diệp tiêu trong các dịch trích và các dung dịch AIA 1 mg/l và ABA 1 mg/l.
Sinh trắc nghiệm cytokinin
Hoạt tính cytokinin được đo bằng sinh trắc nghiệm tử diệp dưa leo (Cucumis sativus L.) (Thomas và cs. ). Hột dưa leo được ngâm 2 giờ, cho nảy mầm sau 24 giờ và khi rễ mầm nhú ra khoảng 2 mm thì tử diệp được cắt ra để dùng trong sinh trắc nghiệm. Mỗi nghiệm thức gồm 5 tử diệp. Hoạt tính cytokinin tỉ lệ thuận với sai biệt trọng lượng tươi của tử diệp so với đối chứng và được tính bằng cách so sánh với dung dịch zeatin 1 mg/l sau 48 giờ chiếu sáng (2000 ± 200 lux), ở nhiệt độ 30 ± 1oC, ẩm độ 65 ± 5%.
Sinh trắc nghiệm gibberellin
Hoạt tính giberelin được đo bằng sinh trắc nghiệm cây mầm xà lách (Lactuca sativa L.) sau 24 giờ cho nảy mầm ở 2000 ± 200 lux, nhiệt độ 30 ± 1oC, ẩm độ 65 ± 5%. Các hột với rễ mầm nhú ra 1mm được chọn để dùng trong sinh trắc nghiệm. Mỗi nghiệm thức gồm 10 cây mầm. Hoạt tính giberelin tỉ lệ thuận với sự sai biệt chiều dài trụ hạ diệp so với đối chứng sau 72 giờ xử lý, và được tính bằng cách so sánh với dung dịch GA3 10 mg/l.
Sự ly trích, phân đoạn và sinh trắc nghiệm các chất điều hòa tăng trưởng thực vật được thực hiện trong ba lần riêng biệt và tính giá trị trung bình.
2.8. Cường độ hô hấp
Khúc cắt chứa mô phân sinh ngọn với trọng lượng 0,5 g của chồi dừa Ta sau khi ươm 7 ngày được đo cường độ hô hấp bằng máy Warburg ở nhiệt độ 25oC, trong tối. Cường độ hô hấp được bằng công thức với đơn vị µl oxygen hấp thu/gam TLT /giờ. Mỗi mẫu đo 3 lần và kết quả là giá trị trung bình của ba lần lặp lại.