1. CÂU HỎI CHUẨN BỊ:
1.1 Trình bày vai trò của hóa chất sử dụng trong bài thí nghiệm?
Trả lời:
- H2SO4 đặc làm môi trường phá mẫu
- CuSO4:K2SO4 làm phá vỡ liê kết peptit trong phá mẫu - Chỉ thi Tashiro dùng để chuẩn độ
- NaOH 30% dùng cho máy chưng cất đạm - H3BO3 bão hòa dùng cho máy chưng cất đạm - HCl 0,1 N dùng để làm dd chuẩn độ
Câu 2: Vì sao trong thí nghiệm này cần phải thực hiện với mẫu trắng?
Trả lời:
- Để xác định một cách chính xác hàm lượng nito có trong mẫu chúng ta cần có mẫu trắng để dễ dàng so sánh trong các bước xác định
Câu 3: Giải thích các hiện tượng trong vô cơ hóa mẫu?
Trả lời:
- Khói bốc lêm khi cho H2SO4 đậm đặc vào: H2SO4 đốt cháy các chất hữu cơ, các chất hữu cơ sau đó bị oxi hóa mạnh tạo ra SO2 và oxi nguyên tử, các khí này được tủ hút thải ra ngoài.
- Dung dịch sau cùng có màu xanh lơ: màu xanh lơ là của H2SO4. Câu 4: Thiết lập công thức xác định hàm lượng protein thô. Trả lời:
Hàm lượng protein thô = Trong đó:
V1HCl là thể tích dd HCl 0,1 N tiêu tốn khi chuẩn độ mẫu trắng m là khối lượng mẫu.
Câu 5: Công thức xác định hàm lượng protein.
Trả lời:
Hàm lượng protein = X × 6,25 X: hàm lượng nitơ tổng
2. CÁCH TIẾN HÀNH
Bước 1: Chuẩn bị mẫu:
- Dùng micropipet hút 1ml mẫu vào ống phá mẫu, thêm 2g hỗn hợp xúc tác CuSO4 : K2SO4 và 10ml H2SO4 đặc
- Cài đặt máy vô cơ hóa theo hướng dẫn, thực hiện vô cơ hóa khi thu được dung dịch trong suốt. Để nguội và cẩn thận định mức đến 100ml bằng nước cất 2 lần
Bước 2: Chưng cất đạm: - Lắp bộ chưng cất đạm.
- Rửa bộ chưng cất đạm bằng cách chưng cất đến khi dung dịch chảy ra ở đầu sinh hàn trung tính. Sau đó, giảm áp đột ngột ở bình cầu để rút toàn bộ dung dịch từ bình cất về bình rửa và xả bỏ.
- Bình hấp thu chứa sẵn 20ml dung dịch H3BO4 bão hòa, thêm 3 giọt Tashiro và đầu ra của ống sinh hàn phải ngập trong dung dịch.
- Cho ml mẫu vào bình cất, tráng phễu bằng nước cất 2 lần để tránh mất mẫu, thêm 3 giọt alizarin natri sunfonat (hoặc HClO4), thêm từ từ dung dịch NaOH 30% cho đến khi dung
Bước 3: Chuẩn độ:
- Lấy bình hấp thu ra, chuẩn độ bằng dung dịch chuẩn HCl 0,1N với chỉ thị Tashiro, dung dịch chuyển từ màu xanh sang màu tím. Ghi thể tích dung dịch chuẩn HCl 0,1N tiêu tốn - Tiến hành tương tự với mẫu trắng (thay dung dịch bằng nước cất 2 lần).
3. TÍNH KẾT QUẢ
Hàm lượng nitơ tổng số được tính bằng g/l theo công thức:
4. NHẬN XÉT
5. PHÂN TÍCH CÁC SAI SỐ THƯỜNG GẶP
- Bộ chưng cất chưa được rữa kỹ - Các khớp nối bị hỡ