CHƯƠNG 4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN 4.1. Kết quả phân lập nấm men từ các mẫu mía
Qua quá trình phân lập 16 mẫu (đất, vỏ và dịch mía) từ 4 tỉnh Sóc Trăng, Cần Thơ, Vĩnh Long và Hậu Giang, phân lập được 39 chủng nấm men.
Bảng 2. Nguồn nguyên liệu, địa điểm thu mẫu, tên các chủng phân lập
Tên chủng nấm men Nguồn phân lập Địa điểm thu mẫu
V-CT1(1), V-CT1(2) Vỏ mía Cổng C (ĐHCT) Ninh Kiều, Cần Thơ (12 chủng) D-CT1(1), D-CT1(2), D-CT1(3), D-CT1(4) Dịch mía V-CT2(1), V-CT2(2) Vỏ mía Khoa Sư phạm (ĐHCT) D-CT2(1), D-CT2(2), D-CT2(3), D-CT2(4) Dịch mía V-HG(1), V-HG(2) Vỏ mía
Ngã Bảy, Hậu Giang (6 chủng) D-HG(1) Dịch mía Đ-HG(1), Đ-HG(2), Đ-HG(3) Đất trồng mía V-ST1(1), V-ST1(2) Vỏ mía Châu Thành, Sóc Trăng (6 chủng) D-ST1(1), D-ST1(2) Dịch mía Đ-ST1(1), Đ-ST1(2) Đất trồng mía V-ST2(1), V-ST2(2) Vỏ mía Mỹ Tú, Sóc Trăng (6 chủng) D-ST2(1), D-ST2(2) Dịch mía Đ-ST2(1), Đ-ST2(2) Đất trồng mía V-VL(1), V-VL(2) Vỏ mía Long Hồ, Vĩnh Long (9 chủng) D-VL(1), D-VL(2), D-VL(3) Dịch mía Đ-VL(1), Đ-VL(2), Đ-VL(3), Đ-VL(4) Đất trồng mía
Dựa vào Bảng 2 ta thấy, ở địa điểm Cần Thơ đã thu được 4 mẫu mía gồm 2 mẫu vỏ mía và 2 mẫu dịch mía, 2 mẫu được mua từ xe nước mía gần Cổng C trường Đại học Cần Thơ (ĐHCT) và 2 mẫu được mua từ xe nước mía gần Khoa Sư phạm (ĐHCT). Tuy nhiên, 4 mẫu này chỉ gồm vỏ và dịch mía, không đa dạng như ở các địa điểm còn lại có thêm mẫu đất trồng mía. Ở mỗi địa điểm, chủ yếu thu 3 mẫu là vỏ, dịch và đất trồng mía. Rõ ràng ta thấy, ở Ninh Kiều (Cần Thơ) và Long Hồ (Vĩnh Long) là nơi có sự đa dạng về số chủng nấm men phân lập được, ở Ninh Kiều (Cần Thơ) là 12 chủng (4 mẫu) và ở Long Hồ (Vĩnh Long) là 9 chủng (3 mẫu), trong khi đó ở mỗi địa điểm còn lại chỉ phân lập được 6 chủng. Ở mỗi địa điểm, với loại mẫu khác nhau thì sự đa dạng về số chủng phân lập được cũng khác nhau, mẫu dịch mía ở Ninh Kiều (Cần Thơ) phân lập được 4 chủng nấm men trong khi dịch mía ở Ngã Bảy (Hậu Giang) chỉ phân lập được 1 chủng và dịch mía ở Châu Thành (Sóc Trăng) chỉ phân lập được 2 chủng.
Có thể kết luận rằng, sự đa dạng về chủng nấm men phân lập tùy thuộc vào loại mẫu (vỏ, dịch, đất trồng mía) và địa điểm thu mẫu.
4.2. Kết quả khảo sát các đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa
4.2.1. Đặc điểm hình thái khuẩn lạc và hình dạng tế bào nấm men, khả năng phân giải urea và gelatine năng phân giải urea và gelatine
Bảng 3. Đặc điểm hình thái, khả năng phân giải urea và gelatin của các chủng nấm men Chủng nấm men Hình dạng tế bào Khuẩn lạc năng Khả phân giải gelatine Khả năng phân giải urea Hình dạng Kích thước (mm)
Đ-ST1(1) Oval nhỏ Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,2 - -
Đ-ST1(2) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt trơn láng, màu trắng đục 2,8 - -
V-ST1(1) Elip dài Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,2 - -
V-ST1(2) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa. 3 - -
D-ST1(1) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,3 - -
D-ST1(2) Oval lớn Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng đục 2,4 - -
Đ-ST2(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
trơn láng, màu trắng đục 2,9 - -
Đ-ST2(2) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt khô nhăn, màu trắng sữa 2,5 - -
V-ST2(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
trơn láng, màu trắng sữa 2,9 - -
V-ST2(2) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,8 - -
D-ST2(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,6 - -
D-ST2(2) Elip dài Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 3,1 - -
Đ-HG(1) Oval lớn Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
trơn láng, màu trắng đục 2,3 - -
Đ-HG(2) Oval nhỏ Tròn, bìa răng cưa, lài, bề mặt trơn láng,
màu trắng đục 2,1 - -
Đ-HG(3) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,2 - -
V-HG(1) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,5 - -
V-HG(2) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
D-HG(1) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,8 - -
Đ-VL(1) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt khô nhăn, màu trắng sữa 2,3 - -
Đ-VL(2) Oval lớn Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,1 - -
Đ-VL(3) Elip dài Tròn, bìa nguyên, lài, bề mặt khô nhăn,
màu trắng sữa 2,9 - -
Đ-VL(4) Oval lớn Tròn, bìa răng cưa, lài, bề mặt khô nhăn,
màu trắng ngà. 2,6 - -
V-VL(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt khô nhăn, màu trắng sữa 2,6 - -
V-VL(2) Oval nhỏ Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 1,8 - -
D-VL(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,6 - -
D-VL(2) Cầu Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt trơn láng, màu trắng đục 2,7 - -
D-VL(3) Elip dài Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,9 - -
V-CT1(1) Cầu Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt khô nhăn, màu trắng sữa 2,6 - -
V-CT1(2) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,9 - -
D-CT1(1) Oval lớn Tròn, bìa nguyên, lài, bề mặt khô nhăn,
màu trắng sữa 2,2 - -
D-CT1(2) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
trơn láng, màu trắng sữa 2,8 - -
D-CT1(3) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,4 - -
D-CT1(4) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
trơn láng, màu trắng đục 2,1 + -
V-CT2(1) Elip dài Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,7 - -
V-CT2(2) Oval nhỏ Tròn, bìa nguyên, lài, bề mặt trơn láng,
màu trắng đục 2,9 - -
D-CT2(1) Oval lớn Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,3 - -
D-CT2(2) Elip dài Tròn, bìa nguyên, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,7 + +
D-CT2(3) Oval nhỏ Tròn, bìa nguyên, mô (không đỉnh), bề
mặt khô nhăn, màu trắng sữa 2,9 - -
D-CT2(4) Elip dài Tròn, bìa răng cưa, mô (có đỉnh), bề mặt
khô nhăn, màu trắng sữa 2,2 - -
Ghi chú: dấu “+” có khả năng phân giải, “ - ” không có khả năng phân giải. Giá trị trong bảng là giá trị trung bình 3 lần lặp lại.
Các chủng nấm men phân lập không có khác biệt lớn về hình thái, kích thước khuẩn lạc: kích thước khuẩn lạc nhỏ (từ 1 đến 4 mm), đa số đều có bìa nguyên, trừ
chủng V-ST1(1), D-ST1(2), D-ST2(2), Đ-HG(1), Đ-HG(2), Đ-VL(2), Đ-VL(4), D- VL(3), V-CT2(1), D-CT2(1), D-CT2(4) bìa răng cưa; màu trắng sữa hoặc màu trắng đục; độ nổi mô chiếm đa số, chỉ một số chủng D-CT1(1), Đ-VL(3), Đ-HG(2) khuẩn lạc lài. Khi quan sát dưới kính hiển vi (ở vật kính E100), dựa vào đặc điểm hình dạng tế bào của 39 chủng nấm men đã phân lập có thể xếp thành 4 nhóm hình dạng đặc trưng.
Nhóm 1 - Tế bào nấm men hình oval nhỏ có 5 chủng: D-CT2(3), Đ-HG(2), Đ- ST1(1), V-CT2(2), V-VL(2).
Nhóm 2 - Tế bào nấm men hình oval lớn có 14 chủng: D-CT1(1), D-CT2(1), D- ST1(2), D-ST2(1), Đ-HG(1),Đ-ST1(2), Đ-ST2(1), Đ-VL(2), Đ-VL(4), V-CT1(2), V- HG(2), V-ST1(2), V-ST2(1), V-VL(1).
Nhóm 3 - Tế bào nấm men hình elip có 18 chủng: D-CT1(2), D-CT1(3), D- CT1(4), D-CT2(2), D-CT2(4), D-HG(1), D-ST1(1), D-ST2(2), D-VL(1), D-VL(3), Đ- HG(3), Đ-ST2(2), Đ-VL(1), Đ-VL(3), V-HG(1), V-CT2(1), V-ST1(1), V-ST2(2).
Nhóm 4 - Tế bào nấm men hình cầu có 2 chủng: D-VL(2), V-CT1(1).
Hình 9. Một số hình dạng đặc trưng của tế bào nấm men được phân lập
Ghi chú:(a): Nhóm 1- Nhóm tế bào hình oval nhỏ; (b): Nhóm 2- Nhóm tế bào hình oval lớn (c): Nhóm 3-Nhóm tế bào hình elip dài; d): Nhóm 4- Nhóm tế bào hình cầu
(a)
(d) (c)
Khả năng phân giải urea
Khả năng phân giải urea (hoạt tính urease) nhằm phát hiện ra nấm men có mang enzyme urease, đây là một trong những thí ngiệm được tiến hành để phân loại, định danh sơ bộ các chủng nấm men phân lập được.
Kết quả Bảng 3 cho thấy, trong tổng số 39 chủng nấm men khảo sát, chỉ có 1 chủng D-CT2(2) có khả năng phân giải urea (làm môi trường Christensen urea broth chuyển sang màu đỏ thẫm), chứng tỏ chủng nấm men này có mang enzyme urease.
Khả năng phân giải gelatine
Khả năng phân giải gelatine nhằm phát hiện ra nấm men có mang enzyme gelatinase, đây là một trong những thí ngiệm được tiến hành để phân loại, định danh sơ bộ các chủng nấm men phân lập được.
Nguyễn Lân Dũng et al. (2004) đã phân lập được 4 chủng nấm men có khả năng thủy phân gelatine, kết quả định danh 4 chủng nấm men đó là Saccharomycopsis capsularis, Saccharomycopsis fibuliger và 2 chủng thuộc loài Endomyces fibuliger.
Kết quả khảo sát cho thấy có 2 chủng nấm men có khả năng phân giải gelatine gồm D-CT1(4) và D-CT2(2), sau khi lấy ra khỏi tủ lạnh, dung dịch trong ống không đông đặc lại, chứng tỏ 2 chủng D-CT1(4) và D-CT2(2) có mang enzyme gelatinase. Hai chủng nấm men này có thể thuộc 2 trong 3 chủng Saccharomycopsis capsularis, Saccharomycopsis fibuliger, Endomyces fibuliger.
4.2.2. Khả năng lên men đường maltose
Kết quả chiều cao cột khí CO2 sinh ra trong ống Durham được trình bày trong Bảng 4.
Bảng 4. Chiều cao cột khí CO2 trong ống Durham lên men đường maltose
Ghi chú: Giá trị trong bảng là giá trị trung bình 3 lần lặp lại, các giá trị trong cùng một cột theo sau có các mẫu tự giống nhau thể hiện khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê ở độ tin cậy 95%.
Chủng nấm men
Chiều cao cột khí CO2 (mm) trong ống durham
4 giờ 8 giờ 12 giờ 16 giờ 24 giờ 32 giờ 40 giờ
D-CT1(1) 1,33ef 4,33fghij 11,00defghi 16,67cdefghi 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(2) 2,00def 3,67fghij 9,67efghijkl 17,67cdefgh 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(3) 2,00def 7,33def 21,00bc 25,67abcd 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(4) 1,00ef 4,00fghij 11,00defghi 18,33cdefgh 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(1) 0,67ef 4,33fghij 12,67defg 16,67cdefghi 29,00a 30,00a 30,00a D-CT2(2) 1,00ef 4,67fghi 10,00defghijk 12,67fghij 28,67a 30,00a 30,00a D-CT2(3) 2,00def 5,33efg 15,33cde 16,33defghi 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(4) 2,67cde 7,00def 13,33def 22,00abcdef 30,00a 30,00a 30,00a D-HG(1) 2,00def 4,00fghij 5,67ghijklm 7,33ijklm 17,67efgh 30,00a 30,00a D-ST1(1) 0,00f 0,67hij 2,67klm 3,33jklm 16,67efghij 24,67bc 30,00a D-ST1(2) 0,00f 1,33ghij 2,33lm 4,33jklm 18,67efg 30,00a 30,00a D-ST2(1) 0,00f 0,00j 0,33m 0,67m 9,00kl 21,00cd 30,00a D-ST2(2) 0,67ef 1,00ghij 2,67klm 4,00jklm 16,00efghij 24,33bc 30,00a D-VL(1) 0,00f 2,00ghij 5,00hijklm 8,00ijklm 21,67bcde 30,00a 30,00a D-VL(2) 0,00f 3,00fghij 12,67defg 19,00bcdefg 30,00a 30,00a 30,00a D-VL(3) 0,00f 1,00ghij 1,67m 2,67klm 10,00jkl 24,67bc 30,00a V-CT1(1) 0,00f 6,67def 12,33deghi 17,67cdefgh 30,00a 30,00a 30,00a V-CT1(2) 0,00f 9,33cde 22,33bc 28,33ab 30,00a 30,00a 30,00a V-CT2(1) 1,00ef 5,00efgh 11,00defghi 15,33efghi 25,67abcd 30,00a 30,00a V-CT2(2) 1,67def 12,00c 25,00ab 26,00abc 28,33ab 30,00a 30,00a V-HG(1) 1,33ef 2,00ghij 2,67klm 5,33iklm 12,67ghijk 25,00abc 30,00a V-HG(2) 12,33a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST1(1) 0,00f 1,33ghij 5,00hijklm 9,00hijklm 25,67abcd 30,00a 30,00a V-ST1(2) 1,00ef 3,67fghij 6,00fghijklm 9,33hijklm 19,67cdef 30,00a 30,00a V-ST2(1) 12,33a 23,67b 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST2(2) 0,00f 0,33ij 0,67m 1,00m 14,67fghijk 27,33ab 30,00a V-VL(1) 0,67ef 2,00ghij 6,33fghijklm 11,00ghijkl 30,00a 30,00a 30,00a V-VL(2) 1,00ef 5,00efgh 16,00cde 24,33abcde 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(1) 5,00c 6,67def 10,33defghij 11,67ghijk 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(2) 8,00b 25,00b 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(3) 0,00f 2,00ghij 4,00ijklm 5,67jklm 19,00defg 30,00a 30,00a Ð-ST1(1) 0,00f 1,33ghij 3,00jklm 4,00jklm 11,67hijk 23,33bc 30,00a Ð-ST1(2) 4,00cd 10,33cd 17,33cd 22,00abcdef 30,00ijkl 30,00a 30,00a Ð-ST2(1) 0,00f 1,33ghij 7,67fghijklm 10,00ghijklm 17,00efghi 28,33ab 30,00a Ð-ST2(2) 0,00f 0,33ij 1,00m 1,67lm 10,33ijkl 27,00ab 30,00a Ð-VL(1) 0,00f 1,67ghij 6,33fghijklm 10,00ghijklm 26,33abc 30,00a 30,00a Ð-VL(2) 0,00f 0,00j 1,00m 1,33m 4,67l 17,67d 30,00a Ð-VL(3) 0,00f 1,00ghij 1,67m 4,00jklm 17,00efghi 28,00ab 30,00a Ð-VL(4) 0,00f 1,00ghij 2,67klm 4,67jklm 13,00fghijk 26,67ab 30,00a
Kết quả Bảng chiều cao cột khí CO2 trong ống Durham khi lên men đường maltose (Bảng 4) cho thấy 39 chủng nấm men này không đồng nhất về khả năng lên men trong dung dịch đường. Ba chủng V-HG(2), Đ-HG(2) và V-ST2(1) có khả năng lên men mạnh nhất, chiều cao cột khí lần lượt là 30; 25 và 23,67 mm sau 8 giờ, khác biệt có ý nghĩa thống kê với độ tin cậy 95% so với các chủng còn lại. Kết quả đo chiều cao cột khí cho thấy lượng CO2 tăng dần theo thời gian do nấm men sử dụng đường maltose. Hai chủng Đ-HG(2), V-ST2(1) đạt giá trị cực đại (30 mm) sau 12 giờ lên men. Tất cả các các chủng nấm men đều đạt giá trị chiều cao cột khí cực đại sau 40 giờ lên men.
4.2.3. Khả năng lên men đường saccharose
Bảng 5. Chiều cao cột khí CO2 trong ống Durham lên men đường saccharose
Ghi chú: Giá trị trong bảng là giá trị trung bình 3 lần lặp lại, các giá trị trong cùng một cột theo sau có các mẫu tự giống nhau thể hiện sự khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê ở độ tin cậy 95%.
Theo kết quả chiều cao cột khí CO2 trong ống Durham lên men đường saccharose (Bảng 5) cho thấy chỉ có 7 chủng nấm men có khả năng lên men đường saccharose, đó là D-VL(2), V-HG(2), V-ST2(1), Ð-HG(1), Ð-HG(2), Ð-ST1(2) và Ð- ST2(1). Đa số các chủng nấm men đã bắt đầu lên men tại thời điểm 4 giờ, trừ 2 chủng Đ-ST1(2), Đ-ST2(1) đã bắt đầu lên men tại thời điểm 8 giờ. Trong đó, 2 chủng Đ- HG(1) và V-HG(2) lên men mạnh nhất đạt giá trị cực đại 30 mm sau 12 giờ, khác biệt có ý nghĩa thống kê 95%. Bên cạnh đó, chủng Đ-HG(2) đạt 26,67 mm sau 12 giờ lên men. Nhìn chung, số chủng nấm men có khả năng lên men đường saccharose rất ít so với đường maltose nhưng xét về tốc độ, những chủng có khả năng lên men thì lên men nhanh hơn, tất cả đạt giá trị cực đại sau 24 giờ.
Chủng nấm men
Chiều cao cột khí CO2 (mm) trong ống Durham
4 giờ 8 giờ 12 giờ 16 giờ 20 giờ 24 giờ
D-VL(2) 1,00d 9,00c 19,67cd 27,67b 30,00a 30,00a V-HG(2) 2,00c 20,67a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST2(1) 1,67c 10,33c 20,00c 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(1) 5,67a 21,33a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(2) 4,67b 16,67b 26,67b 30,00a 30,00a 30,00a Ð-ST1(2) 0,00e 5,33d 18,67d 28,33b 30,00a 30,00a Ð-ST2(1) 0,00e 9,67c 20,67c 30,00a 30,00a 30,00a
4.3. Sơ tuyển hoạt tính lên men của nấm men
Trong quá trình lên men của nấm men, hai sản phẩm chính là ethanol và CO2, để xác định hoạt lực của nấm men có thể dựa trên khả năng sinh khí CO2 trong quá trình lên men (Nguyễn Đức Lượng et al., 2003). Theo phương pháp này, hoạt lực của nấm men có thể được đánh giá thông qua lượng khí được sinh ra trong ống Durham, điều này giúp đánh giá sơ bộ được khả năng lên men của các chủng nấm men phân lập. Kết quả lên men trong ống Durham được trình bày trong Bảng 6.
Bảng 6. Chiều cao cột khí CO2 trong ống Durham lên men đường glucose
Chủng nấm men
Chiều cao cột khí CO2 (mm) trong ống Durham
6 giờ 8 giờ 12 giờ 16 giờ 24 giờ 32 giờ 40 giờ 48 giờ
D-CT1(1) 1,67fgh 7,67d 24,67bc 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(2) 18,33a 22,00a 29,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(3) 1,33fgh 2,00fghi 2,00tu 4,67no 24,00fgh 30,00a 30,00a 30,00a D-CT1(4) 1,00fgh 2,00fghi 4,00qr 9,00jk 28,33abc 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(1) 2,33efg 4,33ef 13,00f 25,33bc 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(2) 2,33efg 3,33efgh 7,00klm 12,00gh 28,33abc 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(3) 4,00de 4,67e 7,33jkl 17,00f 27,67bcd 30,00a 30,00a 30,00a D-CT2(4) 2,00efgh 3,33efgh 5,00nopq 8,00jkl 22,00hij 30,00a 30,00a 30,00a D-HG(1) 0,33gh 1,00hi 1,00uv 1,00qr 10,00m 21,33d 28,67b 30,00a D-ST1(1) 1,00fgh 2,00fghi 6,00lmno 13,00g 26,00def 30,00a 30,00a 30,00a D-ST1(2) 1,00fgh 2,67efgh 6,33lmn 11,67gh 24,67efg 30,00a 30,00a 30,00a D-ST2(1) 1,00fgh 2,00fghi 4,67opqr 9,00jk 21,33ij 30,00a 30,00a 30,00a D-ST2(2) 1,00fgh 2,00fghi 9,00hi 20,00e 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a D-VL(1) 2,33efg 4,00efg 5,67mnop 11,00hi 28,67ab 30,00a 30,00a 30,00a D-VL(2) 5,33d 8,33d 18,67e 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a D-VL(3) 2,67ef 3,00efgh 5,67mnop 11,33ghi 26,33cde 30,00a 30,00a 30,00a V-CT1(1) 2,33efg 4,33ef 11,33g 26,00bc 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-CT1(2) 1,00fgh 1,00hi 2,33stu 4,67no 14,33kl 26,00b 30,00a 30,00a V-CT2(1) 0,67fgh 1,33hi 2,00tu 5,00mn 15,33k 21,67d 22,33c 22,33b V-CT2(2) 4,00de 9,00d 24,33c 29,67a 30,00 30,00a 30,00a 30,00a V-HG(1) 0,67fgh 1,00hi 1,00uv 2,67pq 9,33m 14,33e 14,33d 15,33c V-HG(2) 8,33c 13,67c 19,33e 24,33cd 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST1(1) 1,00fgh 2,00fghi 10,00gh 23,00d 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST1(2) 1,00fgh 3,00efgh 8,67hij 16,33f 28,67ab 30,00a 30,00a 30,00a V-ST2(1) 7,67c 15,00bc 24,67bc 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-ST2(2) 1,00fgh 1,67ghi 3,67qrs 6,67 20,33j 30,00a 30,00a 30,00a V-VL(1) 1,67fgh 2,33efghi 4,00qr 7,67kl 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a V-VL(2) 2,00efgh 2,00fghi 4,33pqr 11,33ghi 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(1) 12,67b 16,33b 22,33d 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(2) 9,67c 14,33bc 21,33d 27,00b 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-HG(3) 0,33gh 1,00hi 1,00uv 3,00op 13,00l 23,67c 30,00a 30,00a Ð-ST1(1) 0,67fgh 2,00fghi 5,00nopq 9,00jk 23,33ghi 30,00a 30,00a 30,00a Ð-ST1(2) 9,00c 20,33a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-ST2(1) 7,67c 13,00c 26,00b 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-ST2(2) 1,00fgh 3,00efgh 8,00ijk 16,67f 28,00abc 30,00a 30,00a 30,00a Ð-VL(1) 0,00h 0,00i 0,00v 0,00x 7,00n 12,67e 13,00e 13,67d Ð-VL(2) 1,00fgh 1,00hi 3,33rst 8,00jkl 28,00abc 30,00a 30,00a 30,00a Ð-VL(3) 1,33fgh 2,67efgh 4,33pqr 9,00jk 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a Ð-VL(4) 1,33fgh 1,67ghi 4,33pqr 9,67ij 30,00a 30,00a 30,00a 30,00a
Ghi chú: Giá trị trong bảng là giá trị trung bình 3 lần lặp lại, các giá trị trong cùng một cột theo sau có các mẫu tự giống nhau thể hiện sự khác biệt không ý nghĩa về mặt thống kê ở độ tin cậy