Tách chiết và tinh sạch ADN tổng số là công việc đầu tiên, cơ bản nhất đối với mọi thao tác trong công nghệ ADN thực vật. Đối với đối tượng là cây ngô, chúng tôi sử dụng phương pháp của Saghai – Maroof và cs (1984) với một vài cải
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 46
tiến nhỏ để phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm hiện có. Quy trình tách chiết ADN tổng số bao gồm 3 bước chính: phá vỡ tế bào, loại protein và ARN, kết tủa ADN. Chất lượng và số lượng ADN tinh sạch được đánh giá bằng phương pháp điện di trên gel agarose 1% và máy đo quang phổ.
Kết quả cho thấy sản phẩm ADN tách chiết thu được có giá trị OD260/OD280
biến thiên từ 1,8 – 2,0 nằm trong giới hạn cho phép. Kết quả cũng phù hợp với yêu cầu vềđộ tinh sạch của sản phẩm ADN tổng số do AMBIONET – CIMMYT công bố.
Ngoài ra, chúng tôi còn tiến hành kiểm tra sản phẩm tách chiết ADN tổng số bằng phương pháp điện di trên gel agarose 1% (hình 4.1). Kết quả cho thấy các mẫu ADN tách chiết được đều có duy nhất một băng, rõ nét.
Hình 4.1. Ảnh điện di kiểm tra ADN tổng số trên gel agarose 1%
Giếng 1,2…25: ADN tổng số tương ứng các dòng N1 đến N25
Như vậy, sản phẩm tách chiết ADN tổng số của 25 dòng ngô nếp tốt, không lẫn tạp chất, đảm bảo tiêu chuẩn để sử dụng trong các bước thí nghiệm tiếp theo.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 47