Tiêu chuẩn chất lƣợng KTC-BCđóng vai trò quan trọng trong đảm bảo và nâng cao chất lƣợng của KTC-BC. Tiêu chuẩn cơ sở đƣợc xây dựng dựa vào các chỉ số chất lƣợng của sản phẩm ngay sau khi sản xuất, đồng thời kết hợp với tiêu chuẩn Châu Âu [17], AABB của Mỹ [11] và tiêu chuẩn theo thông tƣ 26/2013/TT-BYT [1]. Bảo quản KTC-BC ở nhiệt độ 20-24o
C, có lắc liên tục trong thiết bị chuyên dụng.
Tính chất / cảm quan: Khối tiểu cầu có màu vàng chanh hơi đục
Thể tích: Theo tiêu chuẩn trong thông tƣ 26/2013/TT-BYT [1] quy định khối tiểu cầu pool đƣợc sản xuất từ 1 lít máu toàn phần cần đạt thể tích từ 120 ml - 200 ml. Vì vậy, KTC-BC sản xuất từ 2 lít máu toàn phần cần có thể tích từ 240 ml - 400 ml và thể tích thực bằng thể tích ghi trên túi ± 15%.
Thực tế KTC-BC chúng tôi tách đều có thể tích trung bình lớn hơn 300 ml (bảng 3.2), nên chúng tôi xây dựng chỉ tiêu thể tích cho KTC-BC là 300 ± 45 ml.
Số lƣợng tiểu cầu là yếu tố quan trọng để đánh giá chất lƣợng các KTC bảo quản. Trong quá trình bảo quản, có một số lƣợng nhất định TC bị mất
45
đi do nhiều nguyên nhân bao gồm: tổn thƣơng của tế bào do các tác động cơ học trong quá trình sản xuất, bảo quản, tiểu cầu chết tự nhiên vì đời sống TC trung bình chỉ là 8-14 ngày [10]...hoặc do tác động của chính các chất đƣợc giải phóng ra do chuyển hóa, thoái hóa TC trong quá trình bảo quản hoặc do ảnh hƣởng của dung dịch bảo quản hoặc chất lƣợng túi bảo quản, hoặc do ảnh hƣởng của nhiệt độ, điều kiện bảo quản, chất lƣợng túi bảo quản.
Tiêu chuẩn số lƣợng tiểu cầu cần xây dựng: Theo tiêu chuẩn thông tƣ 26/2013/TT-BYT [1] quy định số lƣợng tiểu cầu tách từ 1 lít máu toàn phần cần đạt > 140 x 109 nên KTC-BC tách từ 2 lít máu cần đạt > 280 x 109 tiểu cầu. Theo tiêu chuẩn Châu Âu [17]: khối tiểu cầu tách từ 1,8 - 2,2 lít máu toàn phần cần đạt 200 x109tiểu cầu và mật độ tiểu cầu < 1,5 x 109 tiểu cầu /ml.Theo tiêu chuẩn AABB của Mỹ [11], khối tiểu cầu tách từ 1 túi máu toàn phần 450ml cần đạt 55 x 109 tiểu cầu, vậy khối tiểu cầu pool tách từ 4 - 6 túi máu toàn phần cần đạt từ 220 - 330x 109 tiểu cầu.
Thực tế, KTC-BC chúng tôi tách có số lƣợng tiểu cầu đều > 300 x 109 cuối thời gian bảo quản (xem bảng 3.6), nên chúng tôi xây dựng tiêu chuẩn số lƣợng tiểu cầu cần đạt là > 300 x 109
/túi.
Độ pH của khối tiểu cầu trong quá trình bảo quản thƣờng thay đổi và nguyên nhân chủ yếu là do trong quá trình bảo quản sự thiếu oxy sẽ làm chuyển hóa tiểu cầu theo con đƣờng yếm khí. Sự chuyển hóa glucose của tiểu cầu bảo quản tạo ra lactate nên làm giảm độ pH. Nếu pH của tiểu cầu < 6,0 và > 7,4 thì hình dạng của tiểu cầu sẽ thay đổi từ hình đĩa sang hình cầu và sẽ ảnh hƣởng đến chất lƣợng hồi phục của tiểu cầu sau khi truyền vào cơ thể ngƣời bệnh [33], pH giảm sẽ làm ảnh hƣởng đến chất lƣợng của KTC-BC, theo tiêu chuẩn AABB của Mỹ [11] độ pH < 6,2 sẽ không đƣợc sử dụng cho bệnh nhân.
46
Trong nghiên cứu này, chúng tôi quan sát thấy pH giảm theo thời gian bảo quản. So với ngày 0, pH của ngày 1 và ngày 3 giảm không đáng kể với p>0,05 nhƣng pH ngày 5 (7,259) và ngày 7 (7,234) giảm có ý nghĩa thống kê với p<0,05.
Cuối thời gian bảo quản (ngày 7), pH > 7,2 và vẫn nằm trong giới hạn cho phép của các tiêu chuẩn ( bảng 1.1), theo thông tƣ 26/2013/TT-BYT [1], AABB của Mỹ [11] và Châu Âu [17]. Vì vậy, chúng tôi đƣa ra tiêu chuẩn cho độ pH là 6,4 - 7,4.
Số lƣợng bạch cầu làm ảnh hƣởng đến chất lƣợng của khối tiểu cầu. Số lƣợng bạch cầu giảm trong quá trình bảo quản do bạch cầu có đời sống ngắn (48 - 72 giờ), khi bạch cầu chết sẽ giải phóng ra nhiều chất hóa học trung gian, các enzyme làm ảnh hƣởng đến độ bền của màng tiểu cầu, làm biến đổi hình thái và cấu trúc của TC, làm thay đổi pH. Do cần loại bỏ bạch cầu và cần loại bỏ trƣớc khi bảo quản khối tiểu cầu nên trong nghiên cứu này chúng tôi không theo dõi chỉ số bạch cầu trong thời gian bảo quản.
Theo tiêu chuẩn của thông tƣ 26/2013/TT-BYT [1] và tiêu chuẩn Châu Âu [20], số lƣợng bạch cầu của KTC-BC cần < 1 x 106/túi.Theo tiêu chuẩn AABB của Mỹ [11], số lƣợng bạch cầu KTC-BC cần đạt < 5 x 106/túi.
Thực tế, KTC-BC chúng tôi tách có số lƣợng bạch cầu là <1,0 x 106( bảng 3.4 mục 3.1.4). Nên chúng tôi đƣa ra số lƣợng bạch cầu tồn dƣ của KTC-BC cần đạt < 1 x 106.
Độ vô khuẩn: KTC điều chế bảo quản ở nhiệt độ 200
C - 240C có lắc liên tục, điều kiện này thuận lợi cho vi khuẩn phát triển, chế phẩm máu bị nhiễm khuẩn là nguyên nhân chính gây ra các phản ứng nhiễm trùng trong truyền máu, chủ yếu nhiễm tại thời điểm lấy máu [12]. Trong giai đoạn
47
2001-2007, tỷ lệ KTC điều chế theo phƣơng pháp buffy coat bị nhiễm khuẩn là 15-28/1 triệu KTC đƣợc kiểm tra và số trƣờng hợp tử vong do truyền chế phẩm KTC bị nhiễm khuẩn là 1.5 - 5/1 triệu KTC đƣợc kiểm tra [12]. Theo tiêu chuẩn thông tƣ 26/2013- Bộ y tế [1], kiểm tra độ vô khuẩn của khối tiểu cầu cần thực hiện tối thiểu là 1% tổng số túi đƣợc sản xuất vào ngày cuối thời gian bảo quản và cần phải âm tính, do đó trong điều kiện thƣờng quy thì 1% tổng số sản phẩm đƣợc sản xuất đƣợc bảo quản đến cuối hạn sử dụng để kiểm tra độ vô khuẩn.
Thực tế kết quả kiểm tra vi khuẩn của chúng tôi vào cuối thời gian bảo quản âm tính
Chúng tôi xây dựng chỉ tiêu nuôi cấy phát hiện vi khuẩn phải âm tính vào cuối thời gian bảo quản và tần suất kiểm tra là 1%.
Chỉ số nồng độ glucose: Trong quá trình bảo quản, khối tiểu cầu đƣợc cung cấp đủ oxy thì glucose có trong KTC sẽ chuyển hóa theo chu trình Krebs, nhờ vậy tiểu cầu sẽ đƣợc cung cấp đủ năng lƣợng và có thể đảm bảo cho TC sống và thực hiện những chức năng của nó. Nếu KTC không đƣợc cung cấp đủ oxy thì lƣợng glucose sẽ chuyển hóa theo con đƣờng yếm khí và sản phẩm của quá trình chuyển hóa glucose sẽ sinh ra Lactate, dẫn đến thay đổi pH của KTC, sự thay đổi pH làm tổn thƣơng tiểu cầu. Qua bảng 3.9, cho thấy nồng độ đƣờng giảm dần. So với ngày 0, nồng độ glucose ở ngày 1 giảm không có ý nghĩa thống kê với p > 0,05 nhƣng bắt đầu từ ngày 3 đến ngày 7 nồng độ glucose giảm rõ rệt có ý nghĩa thống kê với p < 0,05. Nồng độ glucose ngày 3, ngày 5, ngày 7 lần lƣợt là 18,91 mmol/l, 17,21 mmol/l, 16,23 mmol/l tƣơng ứng với 91,8 %, 83,5 %, 78,8% so với ngày 0), kết quả này của chúng tôi cũng phù hợp với kết quả của Margriet J (2008)[24]khi nghiên cứu nồng độ đƣờng của KTC-BC vào ngày 7 (16,4 mmol/l).
48
Chỉ số nồng độ LDH: LDH cần thiết cho sự chuyển hóa glucose để tạo năng lƣợng cho tiểu cầu. Kết quả ở bảng 3.10 cho thấy, nồng độ LDH tăng dần theo thời gian bảo quản. So với ngày 0, nồng độ LDH ở ngày 1, ngày 3 tăng lên không đáng kể với p>0,05 nhƣng ngày 5 và ngày 7 tăng rõ có ý nghĩa thống kê với p< 0,05. Nồng độ LDH lần lƣợt tại ngày 5, ngày 7 là 369 U/l, 393 U/l (tăng tƣơng ứng 112,8% và 120,2% so với ngày 0). Chỉ số độ vẩn xoáy: độ vẩn xoáy là một chỉ số của kiểm tra chất lƣợng, đây là phƣơng pháp định tính vì nó có sự liên quan đến chức năng của tiểu cầu, kỹ thuật kiểm tra đơn giản nên có thể kiểm tra độ vẩn xoáy của khối tiểu cầu trƣớc khi cấp phát tiểu cầu [28]. Một số tác giả cho rằng khi pH giảm từ 6,8 xuống 6,0 hoặc cao hơn 7,4 thì tiểu cầu mất khả năng phục hồi [18], sẽ bị phồng lên và chuyển từ hình đĩa sang hình cầu và sẽ vỡ ra [25]. Kết quả bảng 3.13 cho thấy độ vẩn xoáy giảm theo thời gian. Ngày 7,tất cả các túi đều đạt từ mức 2+ trở lên và 93,33% túi đạt mức 3+, 6,67% túi đạt mức 2+.