- Mău phiến lâ,mău bẹ lâ ðộ phủ lông của lâ
4.1.1 Kết quả ñânh giâ mùi thơm vă khả năng mang gen mùi thơm
Mùi thơm lă một tính trạng chất lượng quan trọng. Rất nhiều giống lúa chất lượng cao ñược ưa chuộng ở Chđu  có mùi thơm, ví dụ như: Basmati của Ấn ðộ, Pakistan, Khao Dawk Mali của Thâi Lan, Azucena của Philippines vă Năng Thơm của Việt Nam. Trín thị trường, gạo có mùi thơm thường ñược người tiíu dùng ưa thích vă có giâ cao hơn gạo không có mùi thơm.
Mùi thơm của gạo chịu ảnh hưởng của ñiều kiện ngoại cảnh (ñiều kiện canh tâc, ñộ mặn của ñất), ñiều kiện thu hoạch bảo quản vă bản chất giống. Câc nghiín cứu gần ñđy ñều thống nhất quan ñiểm mùi thơm lă do một gen lặn kí hiệu fgr quy ñịnh.
Hiện nay, phương phâp nếm hạt, kiểm tra với KOH 1,7%, sắc kí khí vă sử dụng chỉ thị phđn tử lă câc phương phâp ñược âp dụng rộng rêi ñể phđn biệt câc giống lúa thơm vă không thơm.
Trong nghiín cứu năy, chúng tôi sử dụng 2 phương phâp ñânh giâ lă phương phâp kiểm tra với KOH 1,7% vă phương phâp dùng chỉ thị phđn tửñể ñânh giâ mùi thơm của câc mẫu giống.
*Kết quảñânh giâ mùi thơm bằng phương phâp kiểm tra với KOH 1,7% ðầu tiín, câc mẫu giống lúa ñược thu về vă ñược phđn loại bằng phương phâp ngửi mẫu lâ vă mẫu bột gạo với KOH1,7%. Câc ñối chứng ñược sử dụng lă Bắc thơm vă IR64.
Kết quả 9 mẫu giống có kí hiệu: 10059, 10089, 10096, 10102, 10123, 10257,10278, 10702, 10718-2 ñược phât hiện lă có mùi thơm. Tất cả câc mẫu
Trường ðại học Nông nghiệp Hă Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………37 có mùi thơm trín lâ ñều cho kết quả có mùi thơm trín bột gạo. Kết quả năy cho thấy sự liín kết chặt chẽ giữa mùi thơm trín hạt vă trín lâ. ðiều năy phù hợp với câc nghiín cứu trước ñđy về mùi thơm.
*Kết quả xâc ñịnh gen mùi thơm bằng phương phâp PCR
ðồng thời, chúng tôi cũng tiến hănh xâc ñịnh gen mùi thơm của câc mẫu giống bằng phương phâp PCR. Thí nghiệm PCR nhận biết kiểu gen thơm ñồng hợp thể lặn fgr/fgrñược tiến hănh dựa trín nghiín cứu của Bradburry vă cộng sự.
Theo nghiín cứu của Bradburry, tính trạng mùi thơm của gạo lă do một gen lặn quy ñịnh. Trong ñó, kiểu gen ñồng hợp thể lặn quy ñịnh tổng hợp 2- acetyle-1-pyrroline, thănh phần quan trọng nhất tạo nín mùi thơm của gạo.
Năm 2005, Bradburry vă cộng sựñê công bố một nghiín cứu về việc sử dụng 4 cặp mồi ñể nhận biết kiểu gen thơm ñồng hợp thể lặn, kiểu gen không thơm ñồng hợp thể trội vă dị hợp thể. Trong ñó, cặp mồi ngoại biín ESP vă INSP nhđn lín một ñoạn khoảng 580bp nằm trín cả kiểu gen thơm (577bp) vă kiểu gen không thơm (585bp). Cặp mồi nội IFAP vă INSP bắt cặp với câc mồi ngoại biín tạo câc sản phẩm ñặc trưng cho kiểu gen: một ñoạn 355bp ở trường hợp ñồng hợp thể trội (không thơm), một ñoạn 257bp ở trường hợp ñồng hợp thể lặn (thơm). ðối với trường hợp dị hợp thể cả 2 ñoạn 355bp vă 257bp cùng xuất hiện ñồng thời.
Ở ñđy, chúng tôi chỉ sử dụng 2 mồi ESP vă IFAP nhđn ñoạn ñặc hiệu cho gen fgr trong 4 mồi ñê ñược sử dụng trong nghiín cứu với ñối chứng dương lă Bắc Thơm vă ñối chứng đm lă IR64. Theo ñó, câc mẫu giống có chứa gen fgr sẽ xuất hiện một vạch có kích thước 257bp trùng với ñối chứng dương Bắc thơm vă câc giống không chứa gen sẽ không có vạch nhđn lín giống nhưñối chứng đm IR64.
Trường ðại học Nông nghiệp Hă Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………38 Kết quả, chúng tôi phât hiện ñược 9 mẫu giống có chứa gen thơm fgr lă câc mẫu giống có kí hiệu: 10059, 10089, 10096, 10102, 10123, 10257,10278, 10702, 10718-2.
Kết quả PCR ñược minh họa ởHình 4.1 dưới ñđy.
Hình 4.1ðiện di sản phẩm PCR xâc ñịnh mẫu giống mang gen fgr
1- Ladder 2- Bắc thơm – ñối chứng dương 3- IR64 – ñối chứng đm 4- 10059 5- 10089 6- 10096 7- 10102 8- 10123 9- 10257
*So sânh kết quả kiểm tra với KOH 1,7% vă kết quả xâc ñịnh gen bằng PCR So sânh kết quả kiểm tra với KOH 1,7% vă kết quả xâc ñịnh gen bằng PCR cho thấy kết quả PCR trùng với kết quả thí nghiệm KOH 1,7% : cả 9 giống có chứa gen fgr theo kết quả PCR ñều có mùi thơm trín lâ vă bột gạo theo kết quả kiểm tra bằng KOH 1,7%.
Từ ñó, chúng tôi ñưa ra kết luận 9 mẫu giống có chứa gen fgr vă có mùi thơm lă: 10059, 10089, 10096, 10102, 10123, 10257,10278, 10702, 10718-2. 10 giống năy phù hợp dùng lăm lăm vật liệu cho chọn tạo giống lúa thơm.
Kết quả so sânh ñược trình băy ở Bảng 4.1 dưới ñđy: 257bp
500bp
Trường ðại học Nông nghiệp Hă Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………39
Bảng 4.1. So sânh kết quả ñânh giâ mùi thơm bằng phương phâp sử dụng KOH 1,7% vă kết quả kiểm tra gen fgr bằng phương phâp PCR.
STT Kí hiệu
giống Mùi trín lâ Mùi bột gạo Gen fgr
1 10059 3 3 + 2 10089 3 3 + 3 10096 3 3 + 4 10102 3 3 + 5 10123 3 3 + 6 10257 3 3 + 7 10278 3 3 + 8 10702 3 3 + 9 10718-2 3 3 + 10 Bắc thơm 3 3 + 11 IR64 1 1 -
Ghi chú: Mùi thơm trín lâ vă mùi thơm bột gạo 3: rất thơm, 2: hơi thơm, 1: không thơm; Gen fgr: +: có gen; -: không có gen.