miễn dịch
Trước khi tiến hành gây đáp ứng miễn dịch, chúng tôi tiến hành kiểm tra độ tinh sạch của protein BclA tái tổ hợp nhằm tránh khả năng làm giảm hiệu suất tạo kháng thể đa dòng kháng lại protein quan tâm theo phương pháp điện di SDS-PEGE 12.5%.
Mẫu BclA tái tổ hợp được pha theo tỷ lệ 1:2 với hỗn hợp dye (950μl đệm SDS- reducing và 50μl β – mercaptothanol). Mẫu được đun nóng 950C trong 5-10 phút và được đổ vào giếng. Cài đặt máy chạy 100v, thời gian 1h30 phút.
Hình 15: Kết quả điện di protein BclA tái tổ hợp trên gel 12.5%
M: Marker prestain (Fermentas)
1: Mẫu BclA tái tổ hợp chưa tinh sạch qua cột Talon (Niken) HP
2: Mẫu rửa qua cột Talon (Niken) HP
3,4,5,6: Các phân đoạn qua cột
Kết quả điện di SDS-PAGE cho thấy: ở cột thứ nhất tương ứng với dung dịch 116 kDa 66 kDa 45 kDa 35 kDa 25 kDa 18.5 kDa 1 3 4 5 6 M
là kích thước của protein BclA, điều đó cho ta thấy trong dung dịch protein tổng số có chứa protein mong muốn. Cột thứ hai tương ứng với dịch rửa qua cột Niken chỉ xuất hiện các băng rất mờ đó là các protein không bám cột được đẩy ra bằng đệm rửa cột, tại vị trí 35kDa hầu như protein đã được giữ lại cột. Từ cột thứ ba đến cột thứ 6, là các phân đoạn tinh sạch chỉ bao gồm một băng duy nhất có trọng lượng 35kDa tương ứng với kích thước trọng lượng phân tử protein BclA được đẩy khỏi cột bằng đệm đẩy Imidazol. Như vậy, protein BclA qua cột Niken có độ tinh sạch và hiệu suất qua cột cao. Kháng nguyên BclA chỉ xuất hiện một băng duy nhất có trọng lượng khoảng 35 kDa đã đảm bảo cho quá trình gây đáp ứng miễn dịch tiếp theo.