3.3.6.1. Dung hợp
Hỗn dịch tế bào Lympho B (nồng độ 106/ml) được đưa vào phối hợp với tế bào Myeloma dũng Sp2/0 và P3X. Sau đú cho thờm vào 1 ml PEG khuấy kỹ trong 1 phỳt, 5 phỳt sau thờm vào 3,5ml mụi trường huyết thanh cú bổ sung HAT và ủ qua đờm ở 370C, 5% CO2, ly tõm hỗn dịch tế bào, hũa cặn vào 30ml mụi trường huyết thanh cú bổ sung HAT và phõn phối vào cỏc giếng của đĩa nhựa Falcon 0,1 ml. Sau dung hợp từ 5 – 7 ngày thờm vào mỗi giếng 0,1ml mụi trường huyết thanh cú bổ sung HAT. Sau 10 ngày dung hợp lấy dịch nổi và dựng phản ứng ELISA để phỏt hiện khỏng thể mong muốn.
Chọn tế bào từ cỏc giếng cú hiệu giỏ khỏng thể cao để tỏch dũng.
3.3.6.2. Tỏch dũng
Sau khi kiểm tra khả năng tạo khỏng thể bằng ELISA, ta biết được giếng nào cú khỏng thể, tuy nhiờn đõy là khỏng thể đa dũng do nhiều dũng tế bào lai tạo thành. Để cú khỏng thể đơn dũng ta phải tiến hành tỏch dũng như sau:
- Chọn một giếng mà dịch nổi cú hiệu giỏ khỏng thể cao nhất trộn đều cỏc tế bào trong giếng đó chọn thành hỗn dịch tế bào thuần nhất. Hỳt hỗn dịch tế bào sang ống ly tõm cú chứa mụi trường phỏt triển để pha loóng tế bào sao cho nồng đọ chỉ đạt 1 tế bào/100àl.
- Chuyển tế bào đó pha loóng sang nuụi trong cỏc giếng đó cú tế bào nuụi, sau đú chuyển vào nuụi trong tủ ấm CO2 ở điều kiện tiờu chuẩn.
- Sau khi tế bào phỏt triển tốt (gần kớn đỏy), kiểm tra lại hiệu giỏ khỏng thể. Chọn ra giếng cú hiệu giỏ khỏng thể cao nhất nhõn lờn với lượng lớn để
bảo quản hoặc tiờm vào ổ bụng chuột, thu dịch bỏng.