3. NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.4. Phương pháp thử kháng sinh ựồ
Chuẩn bị canh trùng: Các vi khuẩn Ạ pleuropneumoniae và H. parasuis ựược cấy vào môi trường TSB (có bổ sung 1- 3 % fresh yeast extract và 5% huyết thanh ngựa) và bồi dưỡng ở 370C và 5 -10% CO2 trong 24 giờ.
Các chủng vi khuẩn P. multocida và S. suis ựược cấy vào môi trường nước thịt BHI, bồi dưỡng ở 370C trong 24 giờ.
Bảng 3.1. Bảng ựánh giá kết quả khả năng mẫn cảm của các vi khuẩn với các chất kháng khuẩn
Các mức ựộ xác ựịnh Loại kháng sinh Hàm lượng
Kháng Mẫn cảm yếu Mẫn cảm Kanamycin 30ộg ≤ 13 14 Ờ 17 ≥ 18 Rifampycin 30ộg ≤ 16 17 Ờ 19 ≥ 20 Cefotaxime 30ộg ≤ 14 15 Ờ 19 ≥ 20 Levofloxacin 5 ộg ≤ 15 16 Ờ 20 ≥ 21 Ampicillin 10ộg ≤ 11 12 Ờ 22 ≥ 22 Amoxycillin 20ộg ≤ 19 - ≥ 20 Neomycin 30ộg ≤ 12 13 Ờ 14 ≥ 15 Cefaclor 30ộg ≤ 14 15 Ờ 16 ≥ 17 Gentamycin 10ộg ≤ 12 - ≥ 13 Lincomycin 15ộg ≤ 12 13 Ờ 14 ≥ 15 Colistin 10ộg ≤ 12 13 Ờ 14 ≥ 15
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 33 Chuẩn bị thạch máu và thạch TSA (có bổ sung 1- 3% fresh yeast extract và 5% huyết thanh ngựa) trên ựĩa, ựể tủ ấm 10 Ờ 20 phút trước khi cấy vi khuẩn.
Lấy 0,1 Ờ 0,2 ml canh trùng cần kiểm tra nhỏ vào ựĩa thạch và láng ựều (canh trùng vi khuẩn P. multocida và S. suis nhỏ vào thạch máu còn canh trùng vi khuẩn Ạ pleuropneumoniae và H. parasuis nhỏ vào thạch TSA), sau ựó ựể ựĩa thạch 3 -5 phút cho khô nhưng không quá 25 phút. Dùng panh ựặt và ấn nhẹ các giấy ựã tẩm các loại kháng sinh (của hãng Oxoid (Anh) hay của hãng Bio Ờ Rad (Pháp) sản xuất) ựặt cách nhau khoảng 15 mm. Sau 15 phút thì lật úp các ựĩa và ựặt vào tủ ấm 370C. đọc kết quả sau 16 Ờ 18 giờ bằng cách ựo ựường kắnh vòng vô khuẩn và căn cứ vào tiêu chuẩn của từng hãng sản xuất giấy kháng sinh ựể xác ựịnh tắnh mẫn cảm với kháng sinh của vi khuẩn.
Bảng ựánh giá kết quả khả năng mẫn cảm của các vi khuẩn với các chất kháng khuẩn (Bảng 3.1).