3. Ngày giao nhiệm vụ luận án: 2011.
1.6.5.Các phương pháp xác định hoạt tính kháng oxy hóa [36,43,44]
Trong thực nghiệm, hoạt tính kháng oxy hóa được đo bằng khả năng quét gốc tự do của phản ứng giữa phân tử chất kháng oxy hóa với các gốc tự do hoạt động.
Dựa vào cơ chế của phản ứng oxy hóa người ta đã đưa ra nhiều phương pháp đo khác nhau.
♦ Đối với phản ứng theo cơ chế chuyển proton (Hydrogen Atom Tranfer), người ta thường sử dụng các phương pháp sau:
- ORAC ( Oxygen Radical Absorbance Capacity): phương pháp dựa vào khả năng hấp thụ các gốc tự do của oxygen.
- TRAP ( Total-trapping antioxidant parameter): phương pháp đo hoạt tính kháng oxy hóa tổng cộng.
- LDL oxidation ( Low Density Lipoprotein oxidation): phương pháp dựa vào sự oxy hóa của lipoprotein tỷ trọng thấp.
- TOSC ( Total Oxidant Scavenging Capacity): phương pháp đo khả năng làm sạch sự oxy hóa tổng cộng.
♦ Các phương pháp đối với cơ chế chuyển electron ( Single Electron Tranfer):
- FRAC ( Ferric Reducing Antioxidant Power): phương pháp khử sắt.
- TEAC ( Trolox equivalent antioxidant activity): phương pháp đo hoạt tính kháng oxy hóa đương lượng Trolox.
- DPPH ( 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl): phương pháp đo khả năng quét gốc tự do DPPH. Gốc tự do DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) là gốc tự do bền do có hiệu ứng liên hợp trong toàn phân tử, cho màu tím trong ethanol và có độ hấp thu cực đại tại 517 nm.[38,39]
Mỗi phương pháp có ưu nhược điểm riêng và áp dụng cho từng loại chất oxy hóa. Thông thường, người ta thường dựa vào các điều kiện như: khả năng phòng thí nghiệm, tính khả thi trong các hệ thống sinh học, mức độ đơn giản của phương pháp, cơ chế phản ứng, loại chất kháng oxy hóa, thời gian, … để chọn phương pháp nghiên cứu hoạt tính phù hợp.
Bảng 1.2: Các phương pháp kháng oxy hóa
Phương pháp Cơ chế Đặc điểm Thiết bị Tính khả thi
ORAC HAT Đơn giản Đơn giản Cao
TRAP HAT Rất phức tạp Phức tạp Cao
TOSC HAT Phức tạp Phức tạp Cao
LDL Oxidation HAT Phức tạp Đơn giản Cao
FRAP SET Rất đơn giản Rất đơn giản Thấp
CUPRAC SET Rất đơn giản Rất đơn giản Trung bình
TEAC SET Đơn giản Đơn giản Thấp
DPPH SET Đơn giản Đơn giản Khá cao
CHƯƠNG 2. THỰC NGHIỆM
Nội dung thực nghiệm bao gồm: - Chiết hesperidin từ vỏ quít
- Tổng hợp hesperetin từ hesperidin
- Tổng hợp dẫn xuất HTTA và HTTM từ hesperetin. Quy trình bán tổng hợp:
(1) Ether dầu hỏa, methanol, nhiệt độ (2) Sulfuric acid, methanol, nhiệt độ (3) Anhydride acetic, sodium acetate, nhiệt độ
(4) Dimethyl sulfate, potassium carbonate, acetone, nhiệt độ