12 34 M1 234 M 34 M
3.4.2.Kết quả kiểm tra sự biểu hiện của gen ltb-gp5 ở mức độ dịch mã
3.4.2.1. Kết quả điện di kiểm tra protein tổng số trên gel polyacrylamide 12.6%
7 dòng dƣơng tính từ phản ứng RT-PCR phía trên đƣợc tiếp tục kiểm tra sự biểu hiện của gen ở mức độ dịch mã. Chúng tôi tiến hành tách protein tổng số từ các dòng tế bào này sau đó điện di kiểm tra protein tổng số trên gel polyacrylamide 12.6%. Kết quả điện di đƣợc minh họa trên Hình 3.20.
+ - 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 M 1000 bp
Luận văn thạc sĩ 2011 – 2013 73
Hình 3.20: Ảnh điện di protein tổng số trên gel polyacrylamide 12.6%. WT: chủng dại (không đƣợc chuyển gen); 1-7: Kí hiệu các dòng tế bào BY-2; M: Thang chuẩn protein (Thermo Sciencetific).
Sử dụng phần mềm BioEdit chúng tôi tính toán đƣợc rằng đoạn gen ltb-gp5
sau khi dịch mã sẽ tạo ra protein có kích thƣớc khoảng 34 kDa. Qua ảnh điện di có thể dễ dàng quan sát thấy ở một số dòng BY-2 chuyển gen (1, 5, 6) xuất hiện băng protein ở kích thƣớc khoảng gần 35 kDa đậm hơn hẳn so với băng tƣơng ứng của dòng BY-2 không đƣợc chuyển gen. Mặt khác, kích thƣớc này lại tƣơng đƣơng với kích thƣớc theo tính toán lý thuyết của kháng nguyên LTB-GP5. Từ kết quả này, chúng tôi suy đoán rằng có thể sự khác nhau đó là do kháng nguyên LTB-GP5 đã đƣợc dịch mã từ ARN thông tin trong các tế bào BY-2 chuyển gen. Tuy nhiên, để khẳng định chính xác nhận định này, chúng tôi tiến hành phản ứng lai miễn dịch Western Blot.
3.4.2.2. Kết quả kiểm tra sự biểu hiện của gen ở mức độ dịch mã bằng phản ứng lai miễn dịch Western Blot
Từ kết quả điện di kiểm tra protein tổng số trên gel polyacrylamide 12.6%, chúng tôi tiến hành phản ứng lai miễn dịch Western Blot cho 3 dòng 1, 5, 6. Phản ứng lai Western Blot dựa trên kháng thể đặc hiệu với kháng nguyên Cmyc. Kết quả phản ứng lai đƣợc minh họa trên Hình 3.21.