12 34 M1 234 M 34 M
3.3.1. Kết quả biến nạp các vector chuyển gen đã thiết kế thành công vào tế bào vi khuẩn Agrobacterium tumefaciensCV58 pGV
Để tiến hành thí nghiệm chuyển các đoạn gen ltb-gp5m, ltb-gp5, ltb-gp3 vào tế bào thuốc lá BY-2 thông qua vi khuẩn A. tumefaciensCV58 pGV2260, trƣớc tiên cần phải tạo ra các chủng vi khuẩn A. tumefaciens CV58 pGV2260 mang các vector chuyển gen pCB-GW-35S-ltb-gp5m, pCB-GW-35S-ltb-gp5, pCB-GW-35S-
ltb-gp3. Do đó, chúng tôi đã tiến hành biến nạp các vector trên vào tế bào vi khuẩn
A. tumefaciens CV58 pGV2260 bằng phƣơng pháp xung điện. Kết quả biến nạp đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp PCR với cặp mồi đặc hiệu cho gen sử dụng khuôn là các plasmid tách ra từ mỗi khuẩn lạc mọc trên đĩa thạch. Sản phẩm PCR đƣợc điện di kiểm tra trên gel agarose 1% cho kết quả trên Hình 3.13.
1 2 3 4 5 M 6 7
Hình 3.13: Ảnh điện di sản phẩm PCR kiểm tra kết quả biến nạp các vector chuyển gen pCB-GW-35S-ltb-gp5m (giếng 6, 7), pCB-GW-35S-ltb-gp5 (giếng 3, 4, 5), pCB-GW- 35S-ltb-gp3 (giếng 1, 2) vào tế bào vi khuẩn A. tumefaciens CV58 pGV2260 trên gel agarose 1%. M: Thang chuẩn ADN 1kb (Geneshun).
Kết quả điện di cho thấy ở cả ba trƣờng hợp sản phẩm PCR đều lên băng với kích thƣớc đúng nhƣ tính toán. Chứng tỏ chúng tôi đã biến nạp thành công các
Luận văn thạc sĩ 2011 – 2013 68
vector pCB-GW-35S-ltb-gp5m, pCB-GW-35S-ltb-gp5, pCB-GW-35S-ltb-gp3 vào tế bào vi khuẩn A. tumefaciens CV58 pGV2260. Các dòng A. tumefaciens CV58 pGV2260-pCB-GW-35S-ltb-gp5m, A. tumefaciens CV58 pGV2260-pCB-GW-35S-
ltb-gp5, A. tumefaciens CV58 pGV2260-pCB-GW-35S-ltb-gp3 đƣợc sử dụng để chuyển các gen ltb-gp5m, ltb-gp5m, ltb-gp3 vào tế bào thuốc lá siêu sinh trƣởng