L ỜI CẢM ƠN
1.7.1.Tình hình nghiên cứu ngoài nướ c
Từ thập niên 80 (thế kỷ XX), nhiều báo cáo của các nhà khoa học cho thấy việc nuôi chung (co-culture) tế bào biểu mô ống dẫn trứng và hợp tử cũng như phôi giai ñoạn sớm (2-4 tế bào) cho phép thu ñược các phôi bò ở giai ñoạn phôi dâu-phôi nang (Eyestone và First, 1986 [21], 1989 [22]; Lu và Gordon, 1987 [40]).
Wiemer và cs, 1993 [72] ñã sử dụng tế bào biểu mô ống dẫn trứng bò bổ sung vào môi trường nuôi, có thể giúp phôi người phát triển tốt hơn trước giai ñoạn cấy phôi hoặc ñông lạnh. Cụ thể tại thời ñiểm thay thế phôi, phôi ở lô nuôi cấy có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng có tỉ lệ phôi bào hiện diện là 4,11 so với 3,81 ở lô nuôi cấy không bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng (P<0,05). Tỉ lệ phân mảnh tế bào lô nuôi cấy không bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng là 1,1 cao hơn ở lô nuôi cấy có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng là 0,38 (P<0,05). Tỉ lệ có thai ở lô nuôi cấy có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng là 43% cao hơn 29% ở lô nuôi cấy không bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng (P<0,05).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 37 lớp ñơn tế bào ống dẫn trứng với phôi bò giai ñoạn sớm sẽ tăng hiệu quả tạo phôi dâu-phôi nang. Nhóm nghiên cứu ñã lấy phôi bò phát triển ở ngày thứ 6 trong in vivo ra nuôi cấy in vitro có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng. Kết quả là tỉ lệ phôi dâu-phôi nang có chất lượng tốt hoặc khá tốt ở 2 lô in- vivo và in vitro có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng là không khác biệt (57% in vivo, 56% in vitro). Kết quả chứng tỏ vai trò của tế bào biểu mô ống dẫn trứng trong việc tăng hiệu quả tạo phôi dâu-phôi nang.
Xu và cs, 1992 [74] ñã nghiên cứu chứng minh hệ thống ñồng nuôi cấy noãn bào và tế bào biểu mô ống dẫn trứng bò giúp tăng hiệu quả thành thục noãn bào và năng lực thụ tinh in vitro. Phôi dâu ñược tạo thành bằng in- vitro
nuôi cấy trong môi trường Ménézo’s B2 có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng ñạt tỉ lệ 66-74% so với môi trường không bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng ñạt tỉ lệ 31-46%. Nuôi cấy phôi in vitro trong môi trường Ménézo B2 có bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng cho kết quả gần giống với nuôi phôi in vivo, tỉ lệ con cái có chửa khi cấy chuyển phôi ñạt 63%.
Các năm tiếp theo, với sự phát triển của khoa học kỹ thuật, việc nghiên cứu tế bào ống dẫn trứng bò ngày càng nhiều nhằm cùng mục ñích nâng cao hiệu quả tạo phôi dâu-phôi nang bò trong thụ tinh trong ống ngiệm.
Năm 2006, Amy [6] ñã ñưa ra một phương pháp giải phẫu và sinh lý học trong việc phân lập và nuôi cấy tế bào biểu mô ống dẫn trứng. Tế bào có thể quan sát ñược sau khi phân lập hoặc nuôi cấy sau 72 giờ ở môi trường nuôi cấy chuẩn. Amy L Way ñã mô tả chi tiết phương pháp cạo dùng ñể phân lập tế bào biểu mô ống dẫn trứng. Môi trường sử dụng là TCM-199 hoặc D’MEM có bổ sung 5% FCS, cứ 2-3 ngày môi trường ñược thay. Tế bào biểu mô ống dẫn trứng ñã phát triển tốt, ñã ñược nuôi thứ cấp và ñánh giá tỉ lệ sống chết bằng trypan blue. Kết quả là tài liệu nghiên cứu rất tốt phục vụ cho giải phẫu sinh lý học và các nghiên cứu chuyên sâu về ống dẫn trứng.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 38 Năm 2008, Jang và cs [31] ñã so sánh ảnh hưởng và biểu hiện gen của tế bào ống dẫn trứng trong hệ thống ñồng nuôi cấy phôi bò- tế bào ống dẫn trứng với việc nuôi phôi không bổ sung tế bào ống dẫn trứng. Các gen liên quan ñến sự phát triển phôi như TGF-β, EGF và IGFBF ñã ñược chứng minh có mặt trong tế bào biểu mô ống dẫn trứng. Kết quả chỉ ra rằng việc bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng giúp tăng tần số phôi phát triển. Cụ thể lô nuôi cấy bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng có tỉ lệ phôi dâu-phôi nang là 28,2% cao hơn lô không bổ sung tế bào biểu mô ống dẫn trứng chỉ ñạt 7,2% (P<0,05).
Tahir và cs, 2011 [64] ñã so sánh sự khác nhau giữa các lớp màng của lớp ñơn tế bào ống dẫn trứng bò với mục ñích ñể duy trì ñặc ñiểm chức năng và tính nguyên vẹn của tế bào ống dẫn trứng phục vụ nuôi cấy in vitro.