1) Nấm gây bệnh (ổ đối chứng) 2) Nấm gây bệnh + CP T
3.7.2 Tách chiết chất kháng sinh từ môi trường lên men xốp
Cân lOg mẫu được nuôi cấy xốp ở nhiệt độ phòng trên gạo có bô sung thẻm dịch khoáng sau 12 ngày, chiết bằng các dung môi khác nhau: izo-propanol, etanol. metanol axeton theo tỷ lệ 1: 1. Cho bay hơi các dung môi còn 5ml ta sẽ thu được các dịch chiết thô. Lấy 0,5 ml dịch chiết tẩm vào các khoanh giấy lọc , đặt vào đĩa petri đã cấy vi sinh vật kiểm định (F. oxysporum ) sau đô để vào tu lạnh 4 - 8 giơ cho Chat kháng sinh khuếch tán vào mổi trường thạch rôi đê ơ nhiệt phòng. Sau 2 ngay xac đinh
hoạt tính kháng sinh, so sánh khả năng hoà tan cùa chất kháng sinh trong từn° dung môi của chủng xạ khuẩn T -41 (bảng 26)
Bảng 26. Hoạt tính kháng sinh của chủng T-41 trên các dung môi hữu cơ
(Vi sinh vật kiểm định F. oxysporum)
Dung môi Hoạt tính kháng sinh ( D-d,mm )
Izo-propanol 15
Etanol 26
Metanol 21
Axeton 25
Kết quả ở bảng 26 cho thấy trong các dịch chiết của chủng xạ khuẩn T-41, các dịch chiết etanol, axeton và metanol có hoạt tính kháng F. oxysporum lớn hơn so với dịch chiết izo-propanol. Trong đó dịch chiết etanol và axeton có hoạt tính gắn như nhau, do đó việc chiết rút chất kháng sinh của chủng T-41 bằng etanol không những cho kết quả cao mà còn giảm được chi phí sản xuất vì etanol lả một loại dung mổi không đắt tiền.
Hình 46: Hoạt tính kháng F. oxysporum của dich chiết bằng n-butanol từ chủng T- 41
Trên cơ sở các kết quả đã nghiên cứu, chúng tôi thấy quy trình tách chiết chất kháng sinh trong dịch nuôi cấy của các chủng D-42, T41 và s. hygroscopicus TC 5-4
được thực hiện theo sơ đồ dưới đây là thích hợp và kinh tế hơn cả