một số chỉ số hóa sinh liên quan tới rối loạn trao đổi lipid ở chuột.
2.3.2.1. Thử độc tính theo đường uống, xác định LD50
Xác định LD50 của dịch chiết hạt loài đậu xanh b ằng đường uống theo phương pháp Lorke [17]. Chuột nhịn đói trước 12 giờ thí nghi ệm được phân lô
Lương Thị Nụ 28 Lớp K37B - SP Sinh
ngẫu nhiên N = 10 và cho uống theo liều tăng dần lên đến 8g/kg (thể tích và khối lượng tối đa cho phép). Theo dõi biểu hiện và số chuột chết trong 72 giờ để đánh giá mức độ độc của dịch chiết hạt đậu xanh.
2.3.2.2. Phương pháp định lượng glucose huyết.
Máu dùng để định lượng glucose huyết là máu toàn phần lấy từ đuôi chuột. Định lượng glucose huyết bằng máy đo đường huyết tự động và bộ kít thử tương ứng (One Touch Ultra, Johnson & Johnson, USA).
Hình 2.3: Phƣơng pháp lấy máu đo glucose huyết Nguyên tắc:
Nguyên tắc hoạt động của phương pháp dựa trên chuỗi phản ứng tạo màu và được đo bằng phương pháp quang học để định lượng glucose huyết.
+ Phản ứng 1: khi máu tiếp xúc với bề mặt của vùng phản ứng que thử, dưới xúc tác đặc hiệu của glucose oxidase (GOD) có trong kít thử, glucose trong máu phản ứng với oxy (không khí) tạo thành acid gluconic và hydro peroxide (H2O2).
+ Phản ứng 2: hydro peroxide vừa tạo ra sẽ phản ứng với O - Dianisidin tạo phức màu và được thiết bị đo quang học trong máy One Touch Ultra chuyển hóa định lượng biểu thị bằng số mmol/l hoặc mg/dl glucose.
Tiến hành:
Ấn nút điều khiển để khởi động máy. Gắn que thử vào máy. Dùng kim châm chuyên dụng châm vào mạch máu ở đuôi chuột, để máu chảy tự nhiên, thấm bỏ giọt đầu tiên, lấy giọt máu thứ 2. Mẫu máu dùng cho việc đo là 1µl, phải là giọt
Lương Thị Nụ 29 Lớp K37B - SP Sinh
máu tròn đầy, phủ kín giọt máu lên vùng phản ứng của que thử. Sau 5 giây, kết quả nồng độ đường huyết sẽ hiển thị trên màn hình.
2.3.2.3. Định lượng một số chỉ số lipid trong huyết thanh
Các chỉ số lipid huyết thanh (cholesterol toàn phần, triglycerid, HDL - c, LDL - c) được xác định trên máy xét nghiệm sinh hóa tự động (Phòng hóa sinh - Bệnh viện Hữu nghị Việt - Xô). Nguyên tắc xác định như sau:
a. Định lƣợng triglycerid
Thuỷ phân triglycerid bằng enzyme lipase, định lượng glycerol giải phóng ra bằng phương pháp đo màu của quynonimin tạo thành từ 4 - aminoantipyrin và 4 - chlorophenol phản ứng với peroxide hydrogen theo các phản ứng sau:
Đo mật độ quang học quynonimin ở bước sóng 546 nm (máy Olympus AU400) rồi so với chuẩn để tính kết quả.
b. Định lƣợng cholesterol toàn phần
Thuỷ phân cholesterol este bằng enzyme cholesterol esterase (CHE) và oxy hoá bằng cholesterol oxydase (CHO). Đo mật độ quang của Quynonimin tạo nên từ phản ứng của hydrogen peroxide với 4 - aminophenazone và phenol nhờ xúc tác của peroxydase. Các phản ứng:
Đo mật độ quang của Quynonimin ở bước sóng 546 nm (bằng máy Olympus AU400) so với ống chuẩn để tính kết quả.
Lương Thị Nụ 30 Lớp K37B - SP Sinh
c. Định lƣợng HDL - c
Nguyên tắc: Xét nghiệm gồm hai bước đặc hiệu. Bước thứ nhất cholesterol trong chylomicron, VLDL, LDL bị loại bỏ và phá hủy bằng các phản ứng enzyme đặc hiệu. Bước thứ hai cholesterol trong HDL được định lượng bằng phản ứng enzyme với sự có mặt của chất surfactant đặc hiệu cho HDL. Bước 1:
Bước 2:
d. Định lƣợng LDL - c.
LDL - c được xác định kết quả theo công thức của Fridewald ( công thức nội suy) :
LDL - c = Choles toàn phần – [HDL - c + 0,45 TG].
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});