type 2
2.3.1.1. Phân nhóm động vật thí nghiệm
Động vật thí nghiệm là chuột nhắt trắng thuần chủng dòng Swiss khỏe mạnh được cân từng con, đánh dấu, phân lô ngẫu nhiên trước khi thí nghiệm.
Lương Thị Nụ 26 Lớp K37B - SP Sinh
a.Tạo mô hình chuột béo phì
- Lô nuôi thường (lô 1): Cho ăn chế độ bình thường (thức ăn chuẩn của Viện Vệ sinh Dịch tễ TW).
- Lô nuôi béo (lô 2 đến lô 12): Cho ăn thức ăn giàu lipid với thành phần được trộn từ nhiều loại thức ăn khác nhau.
Các lô chuột được theo dõi trong vòng 6 tuần, kiểm tra khối lượng hàng tuần.
b.Tạo mô hình chuột ĐTĐ type 2
Mô hình chuột ĐTĐ type 2 được xây dựng trên nhóm chuột béo phì kết hợp với tiêm STZ liều thấp.
Phương pháp:
Chuột nuôi với chế độ ăn giàu chất béo trong 6 tuần ở trên. Sau 16h cho nhịn đói, tiến hành tiêm màng bụng liều đơn STZ (110mg/kg thể trọng) pha trong đệm citrate 0,01M ở pH = 4,3. Sau đó chúng được tiếp nhận nước và thức ăn bình thường. Nồng độ glucose huyết được kiểm tra trước và sau khi tiêm 3 ngày. Những con chuột có đường huyết xác định ≥ 18mmol/l và ổn định sẽ được chọn để uống cao các phân đoạn dịch chiết trong vòng 21 ngày.
c. Phân lô chuột thí nghiệm
Sau khi đã tạo được chuột béo phì và chuột ĐTĐ type 2 chúng tôi tiến hành phân lô chuột thí nghiệm như sau :
* Mô hình chuột béo phì
- Lô 1: Chuột nuôi thường (Lô đối chứng (chung cho cả hai mô hình))
- Lô 2: Chuột béo phì, không điều trị
- Lô 3: Chuột béo phì điều trị bằng cao ethanol
- Lô 4: Chuột béo phì, điều trị bằng cao n - hexan
- Lô 5: Chuột béo phì, điều trị bằng cao chloroform
Lương Thị Nụ 27 Lớp K37B - SP Sinh * Mô hình chuột ĐTĐ
- Lô 7: Chuột ĐTĐ type 2, không điều trị
- Lô 8: Chuột ĐTĐ type 2, điều trị bằng thuốc metformin
- Lô 9: Chuột ĐTĐ type 2, điều trị bằng cao ethanol
- Lô 10: Chuột ĐTĐ type 2, điều trị bằng cao n - hexan
- Lô 11: Chuột ĐTĐ type 2, điều trị bằng cao chloroform
- Lô 12: Chuột ĐTĐ type 2, điều trị bằng cao ethylacetat
2.3.1.2. Tiến hành thí nghiệm
Trong quá trình thí nghiệm, các lô chuột đều được nuôi dưỡng trong điều kiện phòng thí nghiệm Hóa sinh - khoa Sinh - KTNN, Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2. Chuột được cho ăn thức ăn tổng hợp có hàm lượng chất béo cao và uống nước bình thường. Các lô chuột được nuôi trong các lồng riêng biệt để tránh lây chéo có thể xảy ra qua đường hô hấp và tiếp xúc. Hàng ngày theo dõi, ghi chép diễn biến, kết quả thí nghiệm.
Thời gian điều trị là 3 tuần với liều lượng cho uống là 2000mg dịch chiết/kg thể trọng/ngày. Cao của các phân đoạn dịch chiết được hoà vào nước ấm và cho chuột uống hàng ngày vào mỗi buổi sáng.Trước khi cho chuột uống các cao dịch chiết, chuột được nhịn đói nhằm tránh sự ảnh hưởng của thức ăn đến quá trình hấp thụ cao dịch chiết.
Trọng lượng và nồng độ glucose huyết của các lô chuột được theo dõi vào các thời điểm: trước khi tiến hành điều trị, sau điều trị 1, 2, 3 tuần.Vào ngày cuối cùng của thời gian thí nghiệm, sau khi kiểm tra glucose huyết, tiến hành lấy máu tổng số để xác định các chỉ số lipid huyết thanh.