Kết quả phân tắch tắnh ựa hình AND bằng kỹ thuật R- 123docz.net

39 T 1,0 Tròn, cao Xanh Rất rộng 40 T40 1,2 Tròn, cao Tắm Rộng

4.3 Kết quả phân tắch tắnh ựa hình AND bằng kỹ thuật RAPD

Sau khi tách chiết và tinh sạch AND, chúng tôi tiến hành phản ứng

RAPD ựể phân tắch tắnh ựa hình của các dòng ngô nổ thắ nghiệm.

để phân tắch mối quan hệ di truyền của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu, 9 mồi ngẫu nhiên ựã ựược lựa chọn (bảng 3.2). Tổng số băng xuất hiện ựối với mỗi mồi ựã ựược thống kê.

Kết quả cho thấy trong 9 mồi nghiên cứu thì có 7 mồi: OPA-03, OPA- 12, OPB-07, OPB-17, OPF-05, OPL-11, OPM-02 có sản phẩm nhân lên rõ nét, ựa hình, có 1 mồi: OPC 11 cho sản phẩn nhân lên không ựa hình và 1 mồi OPC05 không cho phản ứng RADP. Vậy quan hệ di truyền của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu này ựược xét trên cở sở sự ựa dạng của 7 mồi cho kết quả ựa hình. Mỗi dòng ngô và mỗi mồi nghiên cứu cho thấy số phân ựoạn DNA ựược nhân lên là khác nhau (bảng 4.13)

Bảng 4.13 cho thấy, tổng số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ở từng giống với 7 mồi ngẫu nhiên trên dao ựộng từ 21 ựến 36 phân ựoạn, trong ựó dòng T29 cho ắt phân ựoạn nhất là 21 phân ựoạn và dòng T2 cho nhiều phân ựoạn nhất là 36 phân ựoạn. Tổng số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên thu ựược từ 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với 7 mồi làm 1179.

Dưới ựây là kết quả phân tắch RAPD của từng mồi khi ựiện di sản

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 61

Bảng 4.13 Số phân ựoạn AND xuất hiện ở từng dòng ngô nghiên cứu

STT Dòng Số phân ựoạn DNA ựược nhân lên theo các mồi

OPA 12 OPL 11 OPB 07 OPB 17 OPA 03 OPM 02 OPF 05 Tổng

1 T1 2 3 6 3 3 4 4 25 2 T2 6 4 8 4 3 6 5 36 3 T3 3 6 9 4 3 4 6 35 4 T4 6 4 6 4 3 4 5 32 5 T5 1 6 8 3 3 4 6 31 6 T6 3 3 3 3 3 4 6 25 7 T7 3 7 7 3 2 4 6 32 8 T8 2 6 7 3 3 4 7 32 9 T9 2 4 7 4 3 4 6 30 10 T10 2 5 4 2 3 4 6 26 11 T11 1 4 8 4 3 3 6 29 12 T12 7 4 8 2 3 6 5 35 13 T13 6 6 6 5 3 3 5 34 14 T14 2 6 8 3 3 5 6 33 15 T15 4 6 8 4 3 4 6 35 16 T16 2 3 3 3 3 5 6 25 17 T17 1 7 5 3 3 5 6 30 18 T18 2 6 6 4 3 7 4 32 19 T19 2 5 7 4 1 5 7 31 20 T20 1 2 6 1 3 6 5 24 21 T21 4 6 7 2 3 3 7 32 22 T22 2 4 6 4 3 3 7 29 23 T23 2 5 7 4 3 5 6 32 24 T24 2 5 7 2 3 3 6 28 25 T25 2 5 6 3 3 4 5 28 26 T26 1 5 3 4 2 2 7 24 27 T27 3 4 8 2 3 4 4 28 28 T28 3 4 8 2 3 4 6 30 29 T29 1 4 7 1 2 1 5 21 30 T30 4 5 7 3 2 1 6 28 31 T31 2 5 7 3 2 1 6 26 32 T32 3 4 6 1 2 6 6 28 33 T33 2 3 7 3 2 4 7 28 34 T34 3 6 6 4 2 5 4 30 35 T35 6 5 8 4 2 5 6 36 36 T36 3 4 6 4 3 4 5 29 37 T37 3 3 4 3 3 4 6 26 38 T38 3 6 4 4 3 7 4 31 39 T39 4 4 6 3 3 6 3 29 40 T40 3 3 5 2 3 5 3 24 Tổng 114 187 255 124 109 168 222 1179

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 62

MồiOPA03

Hình 4.1. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPA 03

(M: thang leader 1kb, 1:T1, 2: T2, 3:T3, 4: T4, 5:T5, 6: T6, 7:T7, 8:T8, 9: T9, 10: T10, 11:T11, 12:T12, 13:T13, 14: T14, 15: T15, 16: T16, 17: T17, 18:T18, 19:T19, 20:T20, 21:T21, 22:T22, 23:T23, 24:T24, 25:T25, 26:T26, 27:T27, 28:T28, 29:T29, 30:T30, 31:T31, 32:T34, 33:T33, 34: T34, 35:T35, 36:T36, 37:T37, 38:T38, 39: T39, 40:T40)

Kết quả ựiện di sản phẩm RAPD của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với mồi OPA 03 ựược thể hiện qua hình 4.1. Kết quả cho thấy ựây là mồi có số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên ắt nhất dao ựộng từ 1 ựến 3 phân ựoạn. Kắch thước các phân ựoạn có chiều dài ước tắnh khoảng 900 kb ựến 1400 kb.

Tắnh ựa hình ựược thể hiện ở sự xuất hiện hay không xuất hiện các phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên khi so sánh giữa các dòng với nhau. Qua hình 1 cho thấy số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ở 40 dòng ngô nổ thể hiện sự sai khác trong cấu trúc DNA giữa các dòng ngô nổ tại vị trắ 1200 bp và 1400 bp.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 63

Mồi OPA 12

Hình 4.2. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPA 12

Kết quả ựiện di sản phẩm RAPD của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với mồi OPA 12 ựược thể hiện qua hình 4.2. Kết quả cho thấy ựây là mồi có số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên ắt nhất dao ựộng từ 1 ựến 8 phân ựoạn. Kắch thước của các phân ựoạn nằm trong khoảng 250 bp tới 1500 bp. đây là mồi thể hiện sự ựa hình cao: 7 phân ựoạn ựa hình/8 phân ựoạn ựược tạo ra.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 64

Mồi OPB 07

Hình 4.3. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPB 07

Kết quả ựiện di sản phẩm RAPD của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với mồi OPB 07 ựược thể hiện qua hình 4.3. Kết quả cho thấy ựây là mồi có số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên ắt nhất dao ựộng từ 1 ựến 8 phân ựoạn. Kắch thước của các phân ựoạn nằm trong khoảng 300 bp tới 1500 bp. đây là mồi thể hiện sự ựa hình cao với tỷ lệ các phân ựoạn ựa hình là 7 phân ựoạn ựa hình so với 8 phân ựoạn ựược tạo ra.

Mồi OPB 17

Mồi OPB 17 khuếch ựại ựược 5 phân ựoạn, trong ựó có 4 phân ựoạn ựa hình chiếm 80%.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 65

Mồi OPF 05

Hình 4.4. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPF 05

Kết quả ựiện di sản phẩm RAPD của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với mồi OPF 05 ựược thể hiện qua hình 4.4. Kết quả cho thấy ựây là mồi có số phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên ắt nhất dao ựộng trong khoảng 250 bp tới 1300 bp.

Tắnh ựa hình ựược thể hiện ở sự xuất hiện hay không xuất hiện các phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên khi so sánh giữa các dòng với nhau. Qua hình 4.4 cho thấy giữa các dòng ngô nổ có sự ựa dạng rất lớn là có 6/7 phân ựoạn ựa hình.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 66

Mồi OPM 02

Hình 4.5. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPM 02

Phân tắch ựiện di sản phẩm RAPD của 40 dòng ngô nổ nghiên cứu với mồi OPM 02 (hình 4.5) cho thấy có 2 ựến 9 phân ựoạn DNA ựược nhân bản ngẫu nhiên.

Các phân ựoạn DNA có kắch thước ước tắnh khoảng 250 bp ựến 1.7kb. đây là mồi duy nhất tạo ra các vạch băng DNA ựa hình 100%. Các giống có kắ hiệu T30 và T31 chỉ có 1 băng duy nhất ở vị trắ 1,5kb. Mỗi dòng ngô khác nhau cho các vị trắ DNA nhân bản khác nhau tạo ra tắnh ựa hình rõ của các dòng ngô nổ nghiên cứu.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 67

Mồi OPL 11

Hình 4.6. Kết quả RAPD các dòng ngô nổ với mồi OPL 11

Mồi OPL11 tạo ra 9 phân ựoạn DNA trong ựó có 7 phân ựoạn ựa dạng giữa các dòng ngô nổ nghiên cứu và các phân ựoạn này có kắch thước từ 250 bp tới 1500 bp.

Hai phân ựoạn có kắch thước 990bp và 1000bp có ở cả 40 dòng ngô nổ nghiên cứu và không biểu hiện sự ựa hình. Phân ựoạn có kắch thước 250 bp chỉ xuất hiện ở dòng T7, T34, T38. Ở kắch thước 1500bp các dòng ngô nổ T32, T34.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 68

Với 40 dòng ngô nổ nghiên cứu, qua các phản ứng RAPD chúng tôi ựã ựiện di và thu ựược 1179 phân ựoạn DNA. Kắch thước của các phân ựoạn nằm trong khoảng 0,2kb Ờ 2 kb. Số lượng phân ựoạn tương ứng với mỗi mồi nằm trong khoảng 3 ựến 9 băng, trong ựó mồi OPA 03 cho số băng ắt nhất là 3 băng và mồi OPM 02, OPB 07, OPL 11 cho số phân ựoạn DNA cao (9 phân ựoạn). Qua phân tắch 9 mồi cho thấy có 7 mồi thể hiện sự ựa hình, 2 mồi không biểu hiện sự ựa hình.

Bảng 4.14 cho thấy, mồi OPM 02 cho số phân ựoạn ựa hình cao nhất (100%) sau ựó là mồi OPA 17 với tỷ lệ ựa hình là 87,5%. Mồi OPC 11 không biểu hiện sự ựa hình vì các băng DNA nhân bản ựược ựều có mặt ở tất cả các mẫu ngô nổ nghiên cứu. Ngô Việt Anh (2005) sử dụng 5 mồi nghiên cứu ựa hình của 8 giống ngô cho thấy tỷ lệ ựa hình ựat 33,3% ựến 80%. Như vậy, so với kết quả ựó thì tỷ lệ phân ựoạn ựa hình của 40 dòng ngô nổ trong nghiên cứu này cao hơn.

Bảng 4.14: Tỷ lệ phân ựoạn ựa hình khi sử dụng 7 phân ựoạn ựa hình.

Mồi Phân ựoạn DNA

ựược nhân bản Phân ựoạn ựa hình Tỷ lệ % phân ựoạn ựa hình OPA 17 8 7 87,50% OPL 11 9 7 77,78% OPB 07 9 7 77,78% OPB 17 5 4 80,0% OPA 03 3 2 66,67% OPM 02 9 9 100,0% OPF 05 7 6 85,71%

Mối quan hệ di truyền giữa các dòng ngô dựa trên phân tắch RAPD

Dựa trên sự biểu hiện hay không xuất hiện các phân ựoạn DNA của các dòng khi ựiện di sản phẩm RAPD, hệ số ựa dạng di truyền của các dòng ngô

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 69

nổ ựược xác ựịnh ở mức ựộ phân tử. Các số liệu ựược tắnh toán theo chương trình NTSYS 2.0 (theo quy ước 1= xuất hiện, 0 = không xuất hiện) . Kết quả hệ số tương ựồng di truyền của các dòng ngô nổ nghiên cứu thể hiện ở bảng 4.15.

Hệ số tương ựồng di truyền phản ánh quan hệ di truyền của các dòng ngô nổ với nhau. Hai dòng ngô càng gần nhau về mặt di truyền thì hệ số tương ựồng di truyền càng lớn và ngược lại, hai dòng có hệ số di truyền càng thấp thì hệ số di truyền của chúng càng xa nhau.

Bảng 4.15 thể hiện hệ số di truyền hệ số tương ựồng di truyền của từng cặp giống. Kết quả cho thấy hệ số tương ựồng di truyền của 40 dòng ngô dao ựộng trong khoảng 0,56 tới 0,94. Trong ựó, hai dòng T30 và T31 có hệ số tương ựồng di truyền cao nhất là 0,94; hai cặp dòng T40 và T21, T13 và T20 có hệ số tương ựồng di truyền nhỏ nhất là 0,56.

Sau khi phân tắch hệ số ựồng dạng, sơ ựồ hình cây biểu hiện mối quan hệ giữa các dòng ngô ựã ựược xây dựng ựể chỉ ra sự sai khác của các dòng ngô. Mức ựộ khác nhau ựược biểu hiện bằng hệ số sai khác giữa các dòng. Các dòng có hệ số di truyền cao ựược xếp vào một nhóm, giữa các nhóm lại có mối quan hệ với nhau.

Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 71

Bảng 4.15. Hệ số tương ựồng của các dòng ngô nổ nghiên cứu

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 1.00 1.00 0.84 1.00 0.78 0.82 1.00 0.80 0.76 0.78 1.00 0.82 0.82 0.80 0.66 1.00 0.78 0.70 0.76 0.74 0.68 1.00 0.68 0.72 0.78 0.64 0.86 0.74 1.00 0.72 0.80 0.78 0.72 0.82 0.78 0.84 1.00 0.80 0.80 0.82 0.68 0.78 0.86 0.80 0.88 1.00 0.80 0.76 0.78 0.72 0.82 0.86 0.80 0.84 0.84 1.00 0.82 0.90 0.84 0.70 0.84 0.76 0.74 0.82 0.86 0.78 1.00 0.80 0.80 0.78 0.84 0.78 0.70 0.76 0.76 0.76 0.76 0.74 1.00 0.70 0.66 0.80 0.78 0.68 0.72 0.70 0.66 0.74 0.70 0.64 0.70 1.00 0.76 0.80 0.86 0.76 0.82 0.70 0.80 0.80 0.80 0.76 0.78 0.84 0.74 1.00 0.78 0.78 0.84 0.78 0.88 0.72 0.86 0.86 0.78 0.78 0.80 0.82 0.72 0.8 1.00 0.78 0.78 0.72 0.74 0.72 0.88 0.70 0.74 0.78 0.86 0.76 0.70 0.68 0.70 0.68 1.00 0.74 0.74 0.80 0.66 0.72 0.76 0.74 0.74 0.78 0.78 0.76 0.66 0.68 0.78 0.68 0.80 1.00 0.78 0.74 0.80 0.70 0.72 0.72 0.70 0.70 0.78 0.74 0.72 0.70 0.76 0.82 0.76 0.72 0.80 1.00 0.74 0.74 0.76 0.70 0.76 0.68 0.70 0.74 0.78 0.74 0.76 0.70 0.72 0.74 0.76 0.68 0.68 0.76 1.00 0.74 0.78 0.68 0.58 0.76 0.72 0.70 0.70 0.74 0.74 0.76 0.70 0.56 0.70 0.68 0.80 0.76 0.72 0.68 1.00 0.72 0.72 0.86 0.72 0.78 0.78 0.80 0.80 0.84 0.80 0.78 0.80 0.74 0.84 0.74 0.70 0.78 0.74 0.74 0.70 1.00 0.78 0.82 0.84 0.70 0.84 0.84 0.82 0.86 0.90 0.82 0.88 0.74 0.72 0.82 0.80 0.80 0.80 0.76 0.76 0.76 0.86 1.00 0.80 0.88 0.86 0.72 0.86 0.78 0.84 0.88 0.88 0.88 0.86 0.76 0.70 0.80 0.86 0.82 0.78 0.82 0.78 0.78 0.80 0.90 1.00 0.70 0.74 0.72 0.62 0.84 0.68 0.78 0.82 0.78 0.78 0.80 0.70 0.68 0.74 0.80 0.64 0.68 0.72 0.76 0.80 0.78 0.84 0.82 1.00 0.74 0.78 0.76 0.62 0.80 0.76 0.78 0.82 0.86 0.86 0.80 0.74 0.64 0.74 0.76 0.76 0.80 0.72 0.72 0.84 0.78 0.84 0.86 0.84 1.00 0.68 0.68 0.66 0.64 0.78 0.78 0.76 0.76 0.72 0.80 0.78 0.60 0.70 0.68 0.74 0.78 0.70 0.66 0.74 0.66 0.68 0.82 0.76 0.78 0.70 1.00 0.78 0.78 0.84 0.70 0.76 0.76 0.78 0.78 0.82 0.82 0.80 0.82 0.68 0.78 0.80 0.72 0.76 0.76 0.68 0.80 0.82 0.80 0.82 0.80 0.88 0.62 1.00 0.76 0.80 0.86 0.72 0.78 0.78 0.80 0.84 0.84 0.84 0.82 0.84 0.70 0.80 0.78 0.74 0.74 0.70 0.70 0.74 0.84 0.82 0.84 0.74 0.82 0.68 0.90 1.00 0.78 0.74 0.72 0.62 0.80 0.68 0.74 0.74 0.78 0.78 0.80 0.74 0.60 0.78 0.72 0.72 0.72 0.68 0.68 0.76 0.78 0.80 0.78 0.76 0.76 0.70 0.80 0.82 1.00 0.68 0.68 0.82 0.72 0.70 0.74 0.76 0.76 0.76 0.76 0.74 0.72 0.78 0.76 0.74 0.70 0.74 0.70 0.70 0.62 0.84 0.78 0.76 0.70 0.70 0.72 0.78 0.84 0.78 1.00 0.74 0.74 0.80 0.70 0.76 0.76 0.78 0.82 0.82 0.82 0.80 0.70 0.76 0.78 0.76 0.76 0.76 0.72 0.76 0.68 0.78 0.84 0.82 0.76 0.76 0.78 0.80 0.86 0.84 0.94 1.00 0.68 0.68 0.70 0.64 0.74 0.74 0.76 0.72 0.68 0.76 0.62 0.72 0.66 0.72 0.70 0.74 0.62 0.66 0.70 0.74 0.72 0.70 0.72 0.70 0.66 0.64 0.74 0.80 0.74 0.76 0.78 1.00 0.78 0.78 0.80 0.74 0.72 0.84 0.70 0.78 0.78 0.78 0.80 0.74 0.64 0.74 0.72 0.80 0.72 0.64 0.72 0.68 0.74 0.76 0.74 0.64 0.68 0.70 0.76 0.82 0.72 0.78 0.80 0.82 1.00

Kết quả phân tắch tắnh ựa hình AND bằng kỹ thuật RAPD

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

Các chỉ tiêu theo dõ