Phương pháp đếm số lượng hồng cầu
Nguyên tắc: hồng cầu dược đếm trực tiếp trên kính hiển vi với một khối lượng máu đã được pha loãng chính xác và được đặt trong buồng đếm đã biết trước kích thước. Ghi kết quả số lượng hông cầu đếm được trên mm3 máu.
Cách tiến hành
Hút máu bằng ống hút pha loãng hồng cầu tới vạch 0,5.
Hút tiếp dung dịch pha loãng tới vạch 101, chú ý không để bọt khí. Máu được pha loãng với tỷ lệ 1/200.
Lắc nhẹ ống hút trong 3 phút.
Đậy lamelle lên buồng đếm, lắc một lần nữa, bỏ đi mấy giọt đầu trong ống mao dẫn không có máu, chỉ lấy những giọt trong bầu trộn bằng cách chạm nhẹ đầu dưới ống hút vào cạnh buồng đếm, nhỏ một giọt vừa phải vào nhờ mao dẫn giọt đó sẽ tràn đều vào buồng đếm.
Để buồng đếm vào kính hiển vi, để yên 3 phút cho hồng cầu lắng xuống rồi đếm.
Cách đếm số lượng hồng cầu: Dùng vật kính XI0 quan sát toàn thể buồng đếm Neubauer gồm có 9 ô vuông lớn, trong đó có ô vuông lớn ở trung tâm được chia làm 25 ô vuông trung bình. Mỗi ô vuông trung bình được chia ra làm 16 ô vuông nhỏ. Hồng cầu được đếm ở 5 ô vuông trung bình ở 4 góc và 1 ô vuông trung bình ở chính giữa (tất cả 80 ô vuông nhỏ). Mồi ô nhỏ ở 4 cạnh thì chỉ đếm hồng cầu ở 2 cạnh đó là cạnh trên và cạnh bên trái, ô vuông nhỏ nào cũng đếm như vậy. Đếm ở vật kính X40.
Cách tính:
Gọi A là số hồng cầu có trong 1 mm3 máu nguyên. M là số hồng cầu đếm được trong 5 ô vuông . Ta có:
3.3.6.2 Phương pháp đếm số lượng bạch cầu
Nguyên tắc: Dựa vào nguyên tắc thống kê giữa số lượng bạch cầu và sổ lượng hồng cầu trên vi trường của tiêu bản máu.
Cách tiến hành:
Làm tiêu bản máu: Các huyết cầu sẽ được dàn mỏng trên lame kính và sau khi nhuộm có thể phân biệt được dễ dàng.
Lấy một giọt máu (đường kính 3mm) để lên lame kính khoảng 1/4 miếng lame. Dùng 1 miếng lamelle để ngay trước giọt máu.
Lùi dần miếng lamelle đến khi chạm giọt máu để máu tràn ra hết chiều ngang của cạnh miếng lamelle.
Nghiên lamelle và đẩy lamelle về phía trướcđể dàn đều máu.
Cầm lame lắc mạnh tới khi khô hoàn toàn hoặc để khô tự nhiên sau đó cố đinh 3-5 phút bằng Methanol nhỏ dàn đều lên trên lớp máu dàn mỏng để khô tự nhiên rồi nhuộm.
Nhuộm mẫu: để lame nơi bằng phẳng, nhỏ dung dịch Giemsa lên tiêu bản cố định. Không để thuốc nhuộm tràn ra hai bên rìa lame, để yên 20 phút cho huyết cầu bắt màu thuốc nhuộm. Rửa sạch tiêu bản dưới vòi nước chảy trong 30 giây, sau đó để lame khô tự nhiên.
Cách tính:
Gọi a: Tổng số hồng cầu đếm được trường 10 vi trường. b: Tổng Số bạch cầu đếm được trong 10 vi trường. A: Số lượng hồng cầu/ mm3 máu gà.
B: Số lượng bạch cầu/mm3 máu gà.
Phương pháp định hàm lượng Hemoglobin bằng huyết sắc kế Sahli
Nguyên tắc: huyết sắc tố (Hemoglobin) là một sắc tố màu đỏ của máu. Khi cho máu vào dung dịch acid đựng trong ống chia độ thì Hemoglobin sẽ kết hợp với acid thành acid Hematin có màu nâu, sau đó máu được pha loãng dần với dung dịch acid cho tới khi có màu tương đương với màu của ống đối chứng, đọc kết quả của hàm lượng huyết sắc tố ghi trên ống chia độ theo tỷ lệ % và lượng huyết sắc tố tính bằng gr/100ml máu.
Cách tiến hành:
Dùng Ống nhỏ giọt nhỏ dung dịch acid chlohydric 0,1N vào ống chia độ đến vạch 20.
Dùng pipet Sahli hút máu đến vạch 20mm3 lau phía ngoài pipet bằng giấy thấm và đồng thời điểu chỉnh cho đúng vạch.
Thổi máu vào trong dung dịch acid trong ống chia độ rửa pipet bằng cách thổi và hút lên xuống 3 lần dung dịch acid. Hỗn hợp và acid sẽ có màu nâu
So màu với ống chứng, thường là màu của máu pha loãng đậm hơn màu ống chứng.
Tiếp tục nhỏ từng giọt một acid chlohydric 0,1N vào. Trộn bằng que cấy sau mỗi giọt thêm vào và so sánh màu ở hai ống. Ngừng lại khi màu ở hai ống tương đương nhau. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Đọc kết quả hàm lượng huyết sắc tố trên ống chia độ bàng cách nhìn vào mức đáy cong của hỗn hợp tương ứng với vạch chia độ ghi vạch chia đạt được. Vạch đó chỉ lượng huyết sắc tố của máu xét nghiệm.
Phương pháp đo tỷ lệ huyết cầu
Nguyên tắc:
Hematocrit cho biết tỷ lệ phần trăm của hồng cầu có trong máu.
Hồng cầu là tế bào có tỷ trọng cao nhất sẽ được tách ra sau khi li tâm với tốc độ lớn khỏi các thành phần khác trong máu để xuất hiện theo thứ tự từ đỉnh đến đáy của ống li tâm như sau:
Huyết tương: là lớp trên lỏng màu vàng nhạt bị đẩy ra khỏi những lớp dưới đặc bao gồm tất cả các huyết cầu.
Lóp đệm: màu xám cho tới lớp đỏ xám bao gồm: Tiểu cầu: là lớp màu kem ở trên hết.
Bạch cầu: lớp đỏ xám.
Những hồng cầu có nhân là thành một lớp màu đỏ lợt trong lớp đệm. Hồng cầu: lớp đỏ dầy.
Cách tiến hành:
Dùng những ống vi ti mao dẫn cho vào lọ đựng máu đã được chống đông và làm đầy máu chừng 1 cm đến đáy ống.
Dùng đất sét đặc biệt bít kín chỗ trống ở đáy ống.
Tháo then cài trung tâm trên đầu máy li tâm và lấy đĩa phủ ra ngoài.
Đặt những ống vi ti mao dẫn vào trong những khe nhỏ với đoạn hở hướng về trung tâm và đoạn cuối đáy ống được bịt kín bằng đất sét hướng ra ngoài bờ vòng bánh xe quay để ngăn cản những ống rơi bể trong lúc li tâm.
Đặt lại đĩa phủ vào máy li tâm bằng cách ấn then cài cho chắc chắn và điều chỉnh li tâm trong 5 phút với tốc độ 10000 vòng/phút hoặc li tâm trong 2 phút với tốc độ 16000 vòng/phút.
Sau khi li tâm xong, lấy ống ra và đọc kết quả % của Hematocrit trực tiếp trên bảng đo.