- Các chủng giống được cấy trong ống thạch NA giữ chủng lưu trữ tại phòng
thí nghiệm bộ môn Vi sinh trường Đại học Y Dược Tp. Hồ Chí Minh. Việc cấy giống trong các hộp thạch được thực hiện ở bệnh viện sau đó được đưa về phòng thí nghiệm lưu trữ. Tuy đã được sơ bộ định danh tại cơ sở nhưng để đảm bảo độ chính xác chúng tôi tiến hành cấy phân lập lại và định danh. Khi tiến hành khảo sát thì chúng tôi tăng sinh trong thời gian 16 – 18h bằng môi trường BHI. Sau đó cấy phân lập trong các hộp thạch EMB và ủ 35oC trong 18 – 24h.
- Thực hiện cấy vi khuẩn trên các môi trường định danh.
- Đọc kết quả trên môi trường định danh, làm các phản ứng sinh hóa và dựa
theo tính chất này để định danh vi khuẩn.
+ Môi trường TSI: có chất chỉ thị màu phenol red.
- Nếu vi khuẩn chỉ sử dụng đường glucose thì phần đứng môi
trường có màu vàng.
- Nếu vi khuẩn sử dụng cả hai loại đường glucose và lactose thì cả môi trường phần đứng và phần nghiêng đều có màu vàng.
- Nếu vi khuẩn sinh hơi thì phần thạch sẽ bị nứt hoặc có bóng
hơi.
- Nếu vi khuẩn sinh H2S thì sẽ làm môi trường có màu đen. + Môi trường manitol: Nếu vi khuẩn sử dụng đường manitol thì môi trường có màu vàng.
+ Môi trường SIM:
- Nếu vi khuẩn sinh H2S thì làm môi trường có màu đen.
- Nhỏ 2 – 3 giọt thuốc thử Kovac’s vào ống nghiệm, phản ứng
dương tính khi xuất hiện vòng màu đỏ.
- Nếu vi khuẩn di động thì vi khuẩn mọc lan quanh đường cấy
như rễ cây hoặc làm đục môi trường.
+ Môi trường Citrate: Nếu vi khuẩn có khả năng phân giải natri citrate sẽ làm biến đổi màu môi trường từ xanh lá cây sang xanh dương thẫm.
+ Thử nghiệm urease: Nếu vi khuẩn sinh enzim urease thì làm cho môi trường có màu đỏ.
+ Thử nghiệm PAD: Nhỏ 5 giọt FeCl3 vào ống nghiệm, nếu vi khuẩn
sinh phenylalanine deaminase, thì môi trường sẽ chuyển sang màu xanh. - Định danh vi khuẩn.