Thực hiện với hồng cầu gắn kháng nguyên để phát hiện kháng thể của gà
được giết mổ lò mổ gia cầm ở hai huyện Phú Vang và Hương Thủy. Để phát hiện kháng thể, người ta gắn kháng nguyên lên nền mượn (hồng cầu ngan). Khi kháng nguyên gặp kháng thể đặc hiệu lúc này sẽ xuất hiện hiện tượng ngưng kết.
Các bước thực hiện IHA:
Phản ứng tiến hành trên khay nhựa vi chuẩn độ 96 lỗ đáy chữ U. Để xác định hiệu giá kháng thể đặc hiệu virus Gumboro trong huyết thanh gà mỗi dãy 12 lỗ được sử dụng cho một phản ứng, thí nghiệm được lặp lại 3 đợt.
Đầu tiên cho vào tất cả các lỗ 50 µl dung dịch sinh lý NaCl (pH 7,2), sau đó cho vào lỗ thứ nhất 50 µl huyết thanh cần kiểm. Trộn đều bằng cách hút nhả 5 - 6 đợt rồi hút qua lỗ thứ hai, lại trộn đều rồi hút 50 µl sang lỗ thứ ba và tiếp tục thao tác cho đến lỗ thứ 10 thì hút bỏ 50 µl (vào dung dịch sát trùng). Thêm vào tất cả các lỗ 50 µl hồng cầu gắn kháng nguyên 1,5%. Huyễn dịch hồng cầu gắn kháng nguyên này được khuấy thường xuyên trên máy khuấy từ tính nhằm
tránh sự sa lắng hồng cầu để có huyễn dịch hồng cầu đồng nhất cho tất cả các lỗ khay thí nghiệm.
Đậy kín khay để tránh bị khô, để ở nhiệt độ phòng khoảng 3 - 4 giờ. Đọc kết quả dựa vào lỗ đối chứng (đối chứng âm và đối chứng dương) ở các lỗ thứ 11, 12.
- Đọc kết quả
+ Phản ứng âm tính: hồng cầu lắng xuống tâm đáy, hình thành chấm tròn. + Phản ứng dương tính: có hiện tượng ngưng kết hồng cầu, hồng cầu chìm chậm với thời gian kéo dài thường trải đều trên đáy khay, tạo thành lớp nhăn nheo, tạo thành vòng có đường kính lớn hơn 3/4 đường kính lỗ khay.