Sau khi quan sát và đo kích thước các tế bào vi khuẩn xong, tiến hành nhuộm Gram các vi khuẩn. Trình tự nhuộm Gram được thự hiện như sau:
− Nhỏ 10μL nước cất vơ trùng lên giữa kính mang vật.
− Dùng que cấy đã khử trùng trên ngọn đèn cồn lấy một ít vi sinh vật rồi trải mỏng vi sinh vật trên kính mang vật.
− Hơ mẫu vật trên ngọn lửa đèn cồn nhằm mục đích cố định vi sinh vật trên kính
− Nhỏ từ một đến hai giọt crystal violet lên kính mang vật cĩ chứa mẫu vi sinh vật đã cố định, trải đều crystal violet bằng que cấy và để 2 phút.
− Rửa lại bằng nước cất vơ trùng, chậm nhẹ cho khơ nước.
− Nhỏ từ một đến hai giọt dung dịch iod rồi trải đều bằng que cấy và để trong 1
phút.
− Rửa lại bằng nước cất vơ trùng, chậm nhẹ cho khơ.
− Rửa lại bằng cồn 70o thật nhanh để tẩy màu từ đầu đến cuối kính mang vật sau
cho đến khi giọt cồn cuối cùng khơng cịn màu tím nữa.
− Rửa lại bằng nước cất vơ trùng trong vài giây, chậm nhẹ cho khơ.
− Nhỏ từ một đến hai giọt fushin rồi trải đều bằng que cấy sau đĩ để 1 phút.
− Rửa lại bằng nước cất vơ trùng cho đến giọt nước cuối cùng khơng cịn màu
của fushin.
− Dùng giấy thấm chậm nhẹ cho kính mang vật khơ nước.
− Quan sát mẫu trên kính hiển vi quang học ở độ phĩng đại 400 lần và ghi nhận
Gram của vi khuẩn. Nếu mẫu vi khuẩn cĩ màu tím xanh của Crystal violet là mẫu Gram dương, cĩ màu hồng đỏ của Fushin là mẫu Gram âm.
3.2.4 Quan sát, mơ tả hình dạng, khả năng chuyển động của vi khuẩn a. Mục đích: a. Mục đích:
Đánh giá sơ bộ về những đặc điểm hình thái của chúng, từ đĩ cĩ thể phân nhĩm ra để tiến hành nghiên cứu cho thuận tiện.