lý, sinh hoá của các chủng VSV probiotic
để ựịnh danh và xác ựịnh các ựặc ựiểm hình thái cũng như các ựặc ựiểm sinh lý sinh hóa của các chủng VSV này chúng tôi tiến hành thực hiện theo 2 bước gồm : Quan sát hình thái khuẩn lạc và nhuộm Gram ựể soi tiêu bản tế bào
Bước 1: Quan sát hình thái
để quan sát hình thái vi khuẩn lactic, chúng tôi dùng phương pháp nhuộm ựơn:
Một giọt nước cất ựược nhỏ lên lam kắnh, dùng que cấy lấy một ắt khuẩn lạc hoà tan và giàn ựều. Vết bôi ựược cố ựịnh bằng cách hơ nhẹ trên ngọn lửa ựèn cồn. Vết bôi ựược nhuộm bằng cách nhỏ vài giọt Fuschin lên và giữ trong khoảng 2-3 phút. Rửa nước trên vết nhuộm cho ựến khi nước chảy ra không còn màu thuốc nhuộm. Tiêu bản ựược làm khô trên ựèn cồn và ựược soi trên kắnh hiển vi ở vật kắnh dầu.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp 26
Bước 2: Nhuộm Gram
Phương pháp nhuộm Gram
Nguyên tắc: Nhuộm Gram có vai trò ựặc biệt trong việc phân loại vi khuẩn. Trước tiên, tế bào ựược xử lý với tắm kết tinh và iốt nên có sự tạo thành phức chất tắm tinh thể - iốt bên trong tế bào. Khi vi khuẩn Gram âm bị tẩy cồn, lipid của lớp màng ngoài bị hoà tan làm tăng tắnh thấm của màng dẫn ựến sự rửa trôi phức chất làm cho vi khuẩn mất màu. Khi ựược nhuộm bổ sung chúng sẽ bắt màu với thuốc nhuộm này (ựỏ vang với Safaranin hay ựỏ tắa với Fuchsin). Ở vi khuẩn Gram dương, cồn làm cho các lỗ trong peptidoglican co lại do ựó phức chất tắm tinh thể - iốt bị giữ lại trong tế bào.
Cách tiến hành: Dịch huyền phù tế bào vi khuẩn ựược ựặt lên phiến kắnh bằng que cấy vô trùng. Tiêu bản ựược cố ựịnh bằng ngọn lửa ựèn cồn rồi nhuộm thuốc ựầu bằng dung dịch tắm kết tinh (Crysal violet) trong khoảng 1 phút, sau ựó tiêu bản ựược rửa bằng nước. Tiêu bản ựược nhuộm tiếp bằng dung dịch iốt trong 1 phút rồi rửa bằng nước. Vết bôi ựược phủ bằng dung dịch etanol 95% : axeton (1:1) trong khoảng 1 phút. Sau ựó nhuộm tiếp bằng thuốc nhuộm màu ựỏ (Safranin hay Fuchsin) trong 30 - 60 giây. Rửa qua nước, ựể khô, soi kắnh.