2.3.1 Nội dung nghiên cứu
Vụ 1
Bước 1: Nhận giống từ phòng thí nghiệm
Bước 2: Lột vỏ trấu, tìm hạt trong, bỏ hạt đục
Bước 3: Ngâm và ủ những hạt trong
Bước 4: Đem hạt đi trồng trong nhà lưới
Bước 5: Thu hạt F6, bằng cách ở cá thể có bông chín trước thì thu trước sau đó ghi nhận các chỉ tiêu nông học và đo độ cứng một cách riêng rẽ ở mỗi cá thể.
- 13 –
Bước 6: Chọn 13 dòng có số hạt trên bông nhiều nhất và khảo sát tính chống chịu với rầy nâu bằng cách thử rầy.
Bước 7: Chọn những dòng có cấp độ chống chịu rầy nâu cao trồng tiếp ở vụ 2.
Vụ 2
Bước 1: Lột vỏ trấu những hạt được chọn ở vụ 1, chỉ đem trồng những hạt trong
Bước 2: Trồng 50 hạt của những dòng được chọn cùng với giống đối chứng cây cha và mẹ.
Bước 3: Ở mỗi dòng chọn tối đa 10 bụi có số bông/bụi từ 7 trở lên
Bước 4: Lấy các chỉ tiêu nông học và đo độ cứng của 3 bông trên 1 bụi được chọn (mỗi bụi được tách riêng thành một dòng).
Bước 5: từ những dòng được chọn, phân tích phẩm chất hạt gạo.
2.3.2 Phương pháp đánh giá chỉ tiêu nông học
Thời gian sinh trưởng: Là thời gian từ khi cây lúa nảy mầm cho đến khi thu hoạch (chín 80% bông trở lên trên cá thể).
Chiều cao cây: Lấy chỉ tiêu lúc thu hoạch, đo từ gốc đến chóp bông cao nhất.
Chiều dài bông: Đo từ cổ bông đến chóp bông , lấy chỉ tiêu 3 bông/bụi và tính trung bình.
Số bông/bụi: Đếm tổng số bông trên 1 bụi (ghi nhận cùng lúc với chiều cao cây)
Chiều dài từng lóng: Đo khoảng cách giữa hai đốt lóng liên tiếp nhau và chỉ đo các lóng trên mặt đất. Thứ tự lóng tính từ cổ bông dần xuống gốc, lóng đầu tiên dưới cổ bông là lóng thứ nhất, kế tiếp là theo thứ tự của các lóng còn lại.
Đường kính lóng: dùng thước kẹp đo đường kính của từng lóng.
Độ cứng từng lóng: các lóng thân của cây lúa được tách hết bẹ lá.
- 14 –
Sử dụng máy đo độ cứng IMADA ( Torque gauges IMADA) với độ chính xác ± 0.5% FS. Cách đo độ cứng thân được tiến hành qua hình dưới đây:
2.3.3 Đánh giá chỉ tiêu năng suất và các thành phần năng suất
Thu riêng từng cá thể
Tất cả trọng lượng đều qui về ẩm độ chuẩn 14%
W0 (100- H0)
W14%= X100 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
86
W0: Trọng lượng mẫu cân lúc đầu. H0: Ẩm độ mẫu cân lúc đầu.
Các thành phần năng suất được tính như sau:
C(hạt) Số hạt chắc trên bông = B(bông) C(hạt) Phần trăm hạt chắc = C(hạt) + L(hạt) w1 + w2 + w3 Khối lượng 1000 (g) = 3 Đếm tổng số hạt chắc, kí hiệu C (chắc)
Đếm đúng 1000 hạt chắc, cân và qui về ẩm độ 14%, lặp lại 3 lần, kí hiệu: w1, w2, w3.
2.3.4 Chiều dài và hình dạng hạt gạo
Đo chiều dài hạt gạo dùng giấy kẻ li hay thước đo, mỗi dòng lấy 10 hạt gạo xếp theo chiều dọc và chiều ngang, cố định các hạt nối đuôi nhau trên đường thẳng để đo chiều dài và khích nhau về chiều ngang để đo chiều rộng hạt gạo. Tiến hành đo 3 lần và lấy trung bình. Phân loại chiều dài và hình dạng hạt gạo theo tiêu chuẩn đánh giá phẩm chất hạt gạo của IRRI (Juliano, 1999) được trình bài (Bảng 2.10).
Bảng 2.1 Tiêu chuẩn đành giá chiều dài và hình dạng hạt gạo theo IRRI (Juliano, 1993)
Cấp Chiều dài hạt gạo (mm) Dạng hạt (D/R)
1 Rất dài >7,5 Thon dài >3
3 Dài 6,61-7,5 Trung bình 2,1-3,0
5 Trung bình 5,51-6,6 Bầu 1,1-2,0
7 Ngắn ≤5,5 Tròn ≤1,0
- 15 –
2.3.5 Phương pháp đánh giá một số chỉ tiêu phẩm chất hạt gạo
2.3.4.1 Phân tích hàm lượng Amylose hạt lúa theo phương pháp của Cagampang và Rodriquez (1980) Cagampang và Rodriquez (1980)
Quy trình phân tích hàm lượng amylose theo 4 bước:
Bước 1: chuẩn bị hóa chất: Ethanol 95%, HCl 30%, NaOH 1N, Iod ( Iod 20% + KI 2%).
Bước 2: Ly trích mẫu
Lấy 50mg nội nhũ đã nghiền mịn cho vào ống 50ml, thêm 0,5ml Ethanol 95%, lắc nhẹ cho đều, thêm 9,5ml NaOH 1N, đun sôi trong 10 phút.
Lắc đều để qua đêm.
Bước 3: pha loãng mẫu và đo.
Hút 100µl dịch trích cho vào bình định mức 25ml (đối với mẫu thử - mẫu blank, thay dịch trích bằng 100µl NaOH 1N).
Thêm nước cất đến 1/2 bình và lắc đều. Thêm 250 µl HCl 30%, lắc đều.
Thêm 250 µl dung dịch Iod, lắc đều.
Thêm nước cất đến vạch định mức, chuyển sang ống 50ml và lắc đều trước khi cho vào cuvette, đo độ hấp thụ ở bước sóng 575nm.
Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
Đường chuẩn có dạng Y=aX + b Trong đó: Y: Độ hấp thụ OD
X: lượng amylose có trong mẫu đem Tính hàm lượng amylose theo công thức
%Amylose= 100 (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
2 x
X
Tùy theo hàm lượng amylose các giống có thể phân nhóm thành:
Bảng 2.2. Phân nhóm lúa theo hàm lượng amylose (IRRI, 1988)
Nhóm Đặc tính Hàm lượng amylose(%) Gạo nếp Dẻo 0 – 2 Gạo tẻ: Rất thấp Dẻo trung bình 3 - 10 Thấp Dẻo trung bình 11 - 19 Trung bình Cứng cơm 20 - 25 Cao Rất cứng cơm > 25
- 16 –
2.3.4.2 Độ bền thể gel theo phương pháp của Tang et al., (1991)
. Theo phương pháp của Tang et al., (1991). - Bước 1: Chuẩn bị mẫu
+ Tách vỏ trấu và đo ẩm độ hạt gạo.
+ Nghiền mịn và cân mẫu (100 mg với ẩm độ 12%). - Bước 2: Hoàn tan mẫu
+ Thêm 0,2 ml ethanol 95% có chứa 0,025% thymol blue. + Thêm 2 ml KOH 0,2 N. Sau đó khuấy đều bằng máy Vortex.
+ Đậy nắp kỹ và đun trong nồi cách thủy (nhiệt độ là 1000C) khoảng 5 phút.
+ Lấy ra, để yên trong 5 phút và sau đó làm lạnh trong nồi nước đá 10 phút.
- Bước 3: Đọc và ghi kết quả
+ Để ống nghiệm nằm ngang trên bề mặt bằng phẳng, để gel chảy từ từ, sau một giờ tiến hành đo chiều dài thể gel (từ đáy đến mí trên của thể gel).
+ Đánh giá độ bền thể gel theo thang điểm của IRRI (1996) như được trình bày ở Bảng 2.3
Bảng 2.3 Phân cấp độ bền thể gel (IRRI, 1998)
Cấp Chiều dài thể gel Loại độ bền thể gel (mm) 1 80 -100 Rất mềm 3 61 – 80 Mềm 5 41 – 60 Trung bình 7 35 – 40 Cứng 9 <35 Rất cứng
2.3.4.3 Độ trở hồ theo phương pháp của Jennings et al., (1979)
Chuẩn bị hai mẫu cho mỗi giống được thử. Mỗi mẫu lấy 6 hạt gạo, cạo sạch lớp cám, chọn hạt không bị nứt, để vào đĩa petri.
Thêm 10ml KOH 1,7% vào mỗi đĩa.
Sắp xếp các hạt dạng đều ra để mỗi hạt có đủ chổ nở lan ra. Đậy đĩa petri, để yên khoảng 23 giờ ở nhiệt độ phòng. Đánh giá độ trở hồ của hạt gạo theo Jenning et al. (1979)
- 17 –
Bảng 2.4Phân cấp nhiệt trở hồ (Jenning et al., 1979)
Cấp Độ lan rộng Độ trở hồ
1 Hạt gạo còn nguyên Cao
2 Hạt gạo phồng lên Cao
3 Hạt gạo phồng lên; viền còn nguyên hay rõ nét Cao
4 Hạt gạo phồng lên; viền còn nguyên và nở rộng Trung bình 5 Hạt rã ra; viền hoàn toàn nở rộng Trung bình 6 Hạt tan ra hòa chung với viền Thấp
7 Hạt tan hoàn toàn và quyện vào nhau Thấp (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
∑xi x n Cấp trung bình sẽ được tính theo công thức: Cấp trở hồ=
N
Trong đó: xi: cấp độ trở hồ;
n: số hạt có cấp độ trở hồ ; N: số hạt thử nghiệm;
Bảng 2.5 Đánh giá độ trở hồ theo thang điểm của IRRI (1979)
CẤP Độ trở hồ 1 - 3 4 - 5 6 - 7 Cao Trung bình Thấp
2.3.4.4 Phương pháp xác định hàm lượng protein
Tiến hành theo phương pháp Lowry O.H. (1951). - Bước 1: Chuẩn bị dung dịch ly trích
+ Dung dịch NaOH 0,1 N.
+ Dung dịch A (Na2CO3 2% + Na-K-tatrate 0,05% + NaOH 0,1N). + Dung dịch B (CuSO4 0,1%).
+ Dung dịch C (A:B = 45 :5). + Dung dịch Folin 1 N
- Bước 2: Chuẩn bị mẫu
+ Cân 10 mg bột gạo + 1 ml NaOH 0,1 N. + Lắc ít nhất 2 giờ hay để qua đêm.
- Bước 3: Pha loãng mẫu và đo
+ Ly tâm mẫu 14.000 vòng/phút trong 3 phút.
+ Hút 100 μl mẫu + 1000μl nước cất + 5 ml dung dịch C. Đối với mẫu blank, thay dung dịch ly trích bằng 100 μl NaOH 0,1 N.
+ Trộn đều và để yên trong 10 phút.
- 18 –
+ Lắc đều mẫu, sau đó cho vào cuvette và đo ở bước sóng 580 nm. - Bước 4: Dựng đường chuẩn và tính kết quả
+ Pha dung dịch gốc Bovine serum albumin (BSA). + Đường chuẩn có dạng:
Y = aX + b
+ Trong đó Y: Độ hấp thụ OD.
X: Lượng protein có trong mẫu đem đo. + Hàm lượng protein được tính theo công thức: X
% Protein = x 100 100
2.3.4.5 Trắc nghiệm khả năng kháng rầy nâu Cách tiến hành Cách tiến hành
Chuẩn bị khai bùn: Bùn được cho vào khay, khay bùn được chuẩn bị trước một ngày để mặt bùn được khô ráo, thuận tiện cho việc bố trí.
Thực hiện: Sử dụng giống kháng BN2 và giống chuẩn nhiễm là TN1 làm đối chứng do phòng thí nghiệm Chọn Giống và Sinh Học Ứng Dụng trường đại học Cần Thơ cung cấp và các dòng lúa cần trắc nghiệm tính kháng rầy nâu. Dùng kẹp gắp các hạt lúa vừa nảy mầm cho vào khay bùn theo hàng, mỗi hàng đặt 15 hạt lúa. Khi lúa được 2- 3 lá mầm tiến hành thả rầy 1-2 tuổi với mật độ 3-5 con/cây và theo dõi đánh giá.
Chỉ tiêu theo dõi
Tiến hành lấy chỉ tiêu khi giống chuẩn nhiễm TN1 vừa chết hết do rầy gây hại, khả năng rầy gây hại được đánh giá theo tiêu chuẩn đánh giá quốc tế IRRI (1981) ở bảng 2.6
Trồng những cây còn sống sau khi thử rầy để thu hạt tiếp tục đánh giá các chỉ tiêu phẩm chất. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bảng 2.6 Đánh giá khả năng kháng rầy theo tiêu chuẩn quốc tế (IRRI, 1981)
Cấp
bệnh Đánh giá Biểu hiện
0 Rất kháng Không thiệt hại
1 Kháng Thiệt hại nhẹ
3 Hơi kháng
Lá thứ 1 và thứ 2 của hầu hết các cây bị vàng 1 phần
5 Hơi nhiễm Cây vàng, phân nữa số cây bị héo hoặc chết
7 Nhiễm Hơn phân nữa số cây chêt, còn lại còi cọc nặng
- 19 –
CHƯƠNG III
KẾT QUẢ THẢO LUẬN 3.1 THẾ HỆ F5
Các hạt gạo trong được ủ nảy mầm và trồng trong lô đất ở nhà lưới với khoảng cách 10x10cm. Khi thu hoạch chọn được 13 dòng có số hạt chắc/bông cao. Qua khảo sát độ cứng cây chọn được hai dòng có độ cứng cây cao và nó tiếp tục được chọn để trồng khảo sát ở vụ tiếp theo. Trong quá trình trồng có các loại dịch bệnh và côn trùng gây hại như: Bọ xích hôi, rầy nâu, đốm vằn, sâu đục thân.
3.1.1 Một số chỉ tiêu nông học và thành phần năng suất ở thế hệ F5
3.1.1.1 Thời gian sinh trưởng
Kết quả Bảng 3.1 cho thấy được là thời gian sinh trưởng của các dòng biến thiên trong khoảng 83-87 ngày và trung bình là 85 ngày.Theo Nguyễn Văn Luật (2006) cho rằng lúa có thời gian sinh trưởng dưới 90 ngày thì thuộc nhóm cực ngắn ngày (nhóm A0). Từ nhận định trên thì các cá thể F5 đều có thời gian sinh trưởng nhỏ hơn 90 ngày (thuộc nhóm A0) nhóm cực ngắn ngày.
3.1.1.2 Chiều cao cây
Chiều cao cây được tính từ mặt đất cho tới chóp cao nhất của lá cờ cao nhất của bụi lúa. Kết quả bảng ở 3.1 cho thấy, chỉ tiêu chiều cao cây được theo dõi ở các dòng F5 có chiều cao cây biến thiên trong khoảng 80- 111,7 cm, trung bình là 96 cm. Theo Akita (1989), cây cao từ 90-100 cm thì được coi là lí tưởng về năng suất. Với nhận định này thì chiều cao cây ở các dòng ở thế hệ F5 tương đối phù hợp để có được năng suất . Mặt khác, chiều cao cây lúa là yếu tố quan trọng đối với một số giống lúa, quyết định phần lớn số lượng đỗ ngã và góp phần làm tăng năng suất (Yoshida, 1981). Cụ thể được ghi nhận trong Bảng 3.1.
- 20 –
Bảng 3.1 Thời gian sinh trưởng, chiều cao cây, số bông/bụi và chiều dài bông của cây F5 STT Nghiệm thức TGST (ngày) Chiều cao cây (cm) Số bông/bụi
Chiều dài bông (cm) 1 THL03-4-2-2-2-13 83 98 6 26,0 2 THL03-4-2-2-2-25 85 107 13 26,0 3 THL03-4-2-2-2-29 85 106 6 25,0 4 THL03-4-2-2-2-34 85 110 5 27,0 5 THL03-4-2-2-2-35 80 84 8 28,0 6 THL03-4-2-2-2-46 85 103 5 24,7 7 THL03-4-2-2-2-51 85 110 6 25,5 8 THL03-4-2-2-2-57 85 108 5 28,0 9 THL03-4-2-2-2-63 87 96 9 23,1 10 THL03-4-2-2-2-64 85 102 5 26,0 11 THL03-4-2-2-2-68 85 111 4 27,0 12 THL03-4-2-2-2-74 85 102 5 26,5 13 THL03-4-2-2-2-75 85 103 6 25,0 THL03: Tổ hợp lai 03 3.1.1.3 Số bông/bụi
Qua kết quả ở bảng 3.1 cho thấy, số bông/bụi của các dòng ở F5 nằm trong khoảng 4-13 bông/bụi trung bình là 8 bông/bụi. Theo Nguyễn Đình Giao và
ctv., (1997) thì trong bốn yếu tố tạo năng suất thì số bông/bụi là yếu tố quyết định nhất và sớm nhất. Vì nó có thể góp phần vào 74% năng suất, trong khi đó thì số hạt và trọng lượng hạt chỉ đóng góp 26% năng suất còn lại. Tuy nhiên, Theo Nguyễn Đình Giao và ctv., (1997); Nguyễn Ngọc Đệ (1998) muốn cây lúa cho năng suất cao thì cây lúa cần có số bông/m2 vừa phải, nên gia tăng số hạt chắc/bông trên một đơn vị diện tích là biện pháp gia tăng năng suất tốt hơn là gia tăng số bông/m2.
3.1.1.4 Chiều dài bông
Kết quả Bảng 3.1 cho thấy, chiều dài bông của các dòng F5 nằm trong khoảng 23,1-28cm. Theo Vũ Văn Liết và ctv., (2004) được trích dẫn bởi Phan Thị Hồng Trang (2012).Chiều dài bông do đặc tính di truyền quyết định nhưng cũng một phần chịu ảnh hưởng của điều kiện môi trường nhất là điều kiện dinh dưỡng trong giai đoạn đầu hình thành bông. Giống có bông dài, hạt xếp khích, tỉ lệ hạt lép thấp, khối lượng 1000 hạt cao sẽ cho năng suất
- 21 –
Bảng 3.2 Số hạt chắc/bông, % hạt chắc của cây F5
STT Nghiệm thức Số hạt chắc/ bông % hạt chắc 1 THL03-4-2-2-2-13 224 59,1 2 THL03-4-2-2-2-25 225 61,3 3 THL03-4-2-2-2-29 221 74,9 4 THL03-4-2-2-2-34 218 71,7 5 THL03-4-2-2-2-35 230 66,5 6 THL03-4-2-2-2-46 212 70,9 7 THL03-4-2-2-2-51 250 72,3 8 THL03-4-2-2-2-57 242 60,9 9 THL03-4-2-2-2-63 230 78,5 10 THL03-4-2-2-2-64 239 75,7 11 THL03-4-2-2-2-68 278 71,8 12 THL03-4-2-2-2-74 214 72,1 13 THL03-4-2-2-2-75 224 83,6 THL03: Tổ hợp lai 03 3.1.1.5 Số hạt chắc/bông và tỷ lệ hạt chắc
Kết quả ở Bảng 3.2 cho thấy, số hạt chắc/bông của các dòng của thế hệ F5 cao nhất là THL 03-4-2-2-2-51 và 03-4-2-2-2-68 có 278 hạt/bông, trung bình là THL 03-4-2-2-2- 57 có 242 hạt/bông. Theo Nguyễn Ngọc Đệ (1998), số hạt chắc/bông đóng góp vào năng suất lúa khoảng 75%, lúa sạ trung bình từ 80- 100 hạt/bông và lúa cấy có trung bình từ 100-120 hạt/bông là cho năng suất cao trong điều kiện ĐBSCL.
Tỷ lệ hạt chắc phụ thuộc vào số hoa trên bông, đặc tính sinh lý của cây lúa và chịu ảnh hưởng lớn của điều kiện ngoại cảnh (Nguyễn Ngọc Đệ, 1998). Thường thì số hoa trên bông quá nhiều sẽ dẫn đến tỉ lệ hạt chắc thấp (Nguyễn Ngọc Đệ, 1998). Kết quả Bảng 3.2 cho thấy, tỷ lệ hạt chắc cao nhất là ở THL 03-4-2-2-2-75 có 83,6%, trung bình là THL 03-4-2-2-2-35 có 66,5%. Thấp (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});