L ấy mẫu từ củ Chọn mẫu
c. Thu nhận quả lan và chuẩn bị môi tr−ờng để gieo hạt
Sau khi lai hoặc thụ phấn quả lan sẽ đ−ợc hình thành, chúng ta tiếp tục theo dõi và chăm sóc cây hoa để cho quả không bị sâu bệnh phá hoại. Tuỳ thuộc vào từng giống quả lan có thể thu hái ở độ tuổi từ 5-10 tháng sau khi đậu quả. Thí dụ: lan Hồ điệp có thể thụ quả để gieo hạt từ 5 - 7 tháng tuổi, lan Hoàng thảo 6-8 tháng tuổi, lan Đai châu từ 9-10 tháng tuổi, lan Mạc biên và Thanh tr−ờng từ 7-8 tháng tuổi.
Việc gieo thử các hạt Lan của một số giống Lan khác nhau cho thấy, đối với hạt lan Kiếm đã chín có thể gieo vào các giá thể dớn hoặc rêu Sphagaum đã khử trùng và cấy vào đấy 1 loại nấm cộng sinh vào tr−ớc đó từ 3-5 tuần cho nấm phát triển tr−ớc. Ph−ơng pháp này là dựa vào đặc tính nảy mầm của hạt lan cần phải có nấm cộng sinh trong điều kiện tự nhiên. Tuy nhiên, trong điều kiện tự nhiên tỷ lệ hạt nảy mầm rất thấp chỉ từ 1-2%. Vì hạt không gặp đ−ợc các nấm cộng sinh và điều kiện nhiệt độ, độ ẩm phù hợp. Do đó để tăng khả năng nảy mầm ở những hạt lan đã chín ng−ời ta tiến hành tìm kiếm các môi tr−ờng nhằm tạo và tách các nấm cộng sinh của lan trong điều kiện tự nhiên rồi nhân lên và cấy vào môi tr−ờng nh− dớn Cybotium hoặc rêu Sphagaum tr−ớc 3-5 tuần rồi mới gieo hạt lan. Làm nh− vậy có thể tăng đ−ợc độ nảy mầm của hạt lan từ 1% lên 50 - 60%.
Thử nghiệm gieo hạt lan chín và hạt lan xanh (đã chín về mặt sinh lý) trên môi tr−ờng dinh d−ỡng nhân tạo Knudson “C” + 10 g đường Sucroza + 7 g agar + 30 gr dinh dưỡng chuối xanh + 100 ml nước dừa hoặc mụi trường vw + 10 g đường Sucroza + 100 ml nước dưà + 30g khoai tõy + 17g peptor + 7 gagar + và các chất kích thích, điều chỉnh pH môi tr−ờng từ 5,5 - 5,8, đặt trong điều kiện nhiệt độ 20- 250C, thời gian chiếu sáng là 13 - 15 giờ ở c−ờng độ 2 000 - 2 500 Lux/m2. Sau khi hạt lan nảy mầm đều thì tăng c−ờng độ chiếu sáng lên 8 000 - 12 000 Lux/m2. Thời gian chiếu sáng giảm xuống từ 8-10 giờ.
Thu hạt Lan để gieo Đ−a hạt Lan vào môi tr−ờng lỏng để nuôi cấy
Hạt Lan đã nảy mầm trong môi tr−ờng nuôi cấy
d. Tiếp tục cấy chuyển cây lan con mọc từ hạt sang môi tr−ờng MS cải tiến hoặc môi tr−ờng Knudson “C” cú bổ sung đuờng 10 g + 120 ml ND + 20 g dịch chiết