2. THỰC NGHIỆM VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU
2.2.1. Tổng hợp vật liệu nano chitosan và vật liệu cấu trỳc nano trờn nền chitosan
cung cấp bởi viện Hải dương học Nha Trang.
Curcumin (Cur, 1,7-bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6- heptadiene-3,5- dione) được chiết tỏch và làm sạch tại Viện Húa học – Viện Hàn lõm Khoa học và cụng nghệ Việt Nam.
Gossypol được mua từ Viện Vật liệu y dược quốc gia Việt Nam.
Cholesterol oxidase (ChOx, EC 1.1.3.6, Pseudomonas fluorescens, 24 U/mg), cholesterol; anilin (Ani); 25% glutaraldehyd (GA), N-ethyl-N’-(3- dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochlorid (EDC), N-hydroxysuccinimide
(NHS), và Triton X-100 được mua từ hóng Sigma–Aldrich.
Cỏc húa chất khỏc đều được sản xuất bởi hóng Sigma-Aldrich cú độ tinh khiết phõn tớch, bao gồm axớt hydrochloric (HCl), axớt axetic, axớt acrylic muối ferric chloride hexa-hydrate (FeCl3ã6H2O), muối ferrous chloride tetra-hydrate (FeCl2ã4H2O), sodium hydroxide (NaOH), ammonium hydroxid (NH4OH, 26% of ammonia), axớt oleic (C17H33COOH), bạc nitrỏt (AgNO3), styrene, ammonium persulfate ((NH4)2S2O8)…Cỏc dung mụi sử dụng là cỏc dung mụi cú độ tinh khiết phõn tớch mua từ hóng Sigma-Aldrich như cồn, dichloromethane (DCM).
Cỏc húa chất và dung mụi được dựng trực tiếp khi làm thớ nghiệm mà khụng cần trải qua cỏc bước làm sạch, tinh chế hoặc làm khan lại.
2.2. Kĩ thuật thực nghiệm
2.2.1. Tổng hợp vật liệu nano chitosan và vật liệu cấu trỳc nano trờn nền chitosan chitosan
2.2.1.1. Chế tạo vật liệu nano chitosan gossypol
Vật liệu nano chitosan (CS) được chế tạo bằng phương phỏp liờn kết khõu mạch cộng húa trị sử dụng gossypol (GP) như tỏc nhõn khõu mạch. Nhúm chức anđehit của cỏc phõn tử GP hỡnh thành liờn kết cộng húa trị với nhúm chức amin của cỏc phõn tử CS, khõu cỏc chuỗi CS với nhau, và hỡnh thành nờn cỏc hạt nano chitosan (GPCS).
41
Hũa 20 mg chitosan trong 100 ml axit HCl 1%, khuấy mạnh trong 1h. Sau đú khuấy nhẹ trong 8 giờ để chitosan tan hoàn toàn. Hũa 60 mg gossypol vào 100 ml etanol bằng cỏch siờu õm trong 30 phỳt. Sản phẩm GPCS thu được bằng cỏch nhỏ từ từ dung dịch gossypol vào dung dịch chitosan ở trờn, phản ứng thực hiện trong điều kiện khuấy nhẹ trong búng tối thời gian 3h. Sau đú sử dụng CH2Cl2 để chiết lấy sản phẩm, cuối cựng, hỗn hợp được đụng khụ thu được sản phẩm màu vàng nhạt.
2.2.1.2. Vật liệu nano Ag/CS
Cho 25ml dung dịch AgNO3 vào 100 ml dung dịch chitosan (pha trong dung dịch CH3COOH 1%). Thay đổi nồng độ AgNO3, dung dịch chitosan và nhiệt độ phản ứng. Đối với phản ứng xỏc định cỏc thụng số động học được thực hiện trờn hệ mỏy UV-Vis Agilent 8453.
2.2.1.3. Vật liệu nano Fe3O4/CS
Vật liệu Fe3O4/CS được tổng hợp bằng phương phỏp đồng kết tủa Fe2+ và Fe3+ bằng dung dịch NaOH trong dung dịch chitosan. Đầu tiờn, hũa tan chitosan trong dung dịch CH3COOH 1%, sau đú hũa tan hỗn hợp muối Fe2+ và Fe3+ vào theo tỉ lệ mol 1:2. Nhỏ hỗn hợp vào dung dịch NaOH 30%, để yờn ở nhiệt độ phũng trong 24 giờ, lọc rửa kết tủa. Cuối cựng sấy chõn khụng sản phẩm thu được trong chõn khụng ở 700C trong 24 giờ.