3. TỔNG HỢP, ĐẶC TRƯNG VẬT LIỆU TỔ HỢP CẤU TRÚC NANO TRấN
5.4. Vật liệu tổ hợp cấu trỳc nano trờn nền polyme dẫn trong chế tạo cảm biến sinh
chế tạo cảm biến sinh học điện húa
95
- Dung dịch -D-Glucose 0,05M được chuẩn bị bằng cỏch cõn chớnh xỏc 0,9008 gam -D-Glucose (Merck) hũa tan trong 100ml đệm PBS (pH=7). Dung dịch được pha trước ớt nhất 24 giờ trước khi sử dụng và được bảo quản ở 4oC.
- Dung dịch gốc cholesterol 10mM được chuẩn bị bằng cỏch cõn chớnh xỏc 0,1933 gam cholesterol (Sigma-Aldrich) hũa tan trong 5ml Triton X-100 và dung dịch đệm PBS 20mM (pH=7). Gia nhiệt 60oC cú sự hỗ trợ của siờu õm cho dung dịch tan hoàn toàn rồi định mức tới 50ml. Bảo quản dung dịch ở 4oC và trỏnh ỏnh sỏng. Pha loóng dung dịch cholesterol từ dung dịch gốc bằng dung mụi là hỗn hợp của đệm PBS 20mM (pH=7) cú chứa 1% Triton X-100.
- Triton X-100, K3[Fe(CN)6], dung dịch đệm PBS 50mM (pH=7 cú chứa NaCl 0,9%). - Hệ điện húa đa năng Autolab/PGSTAT30 hoặc Autolab/PGSTAT12 với cấu hỡnh ba điện cực.
- Mỏy đo pH, micropipet và cỏc dụng cụ thủy tinh cần thiết.
* Thực nghiệm quột thế vũng (CV)
Nghiờn cứu sự thay đổi phổ CV của màng nanocomposite sinh học khi quột trong dung dịch PBS cú và khụng cú cơ chất (glucose hoặc cholesterol) sẽ sơ bộ tỡm được điện ỏp phự hợp cho phộp phõn tớch theo nguyờn lý đo dũng.
Dải quột của phổ CV được đặt trong khoảng từ -0,8 tới +0,8V, tốc độ quột 50mV/s. Cảm biến enzym ban đầu được quột trong dung dịch PBS 50mM, sau đú cơ chất là glucose hoặc cholesterol tương ứng với cảm biến GOx hoặc ChOx được thờm vào bỡnh điện húa, khuấy trong 10 giõy. Quan sỏt sự thay đổi giữa cỏc vũng quột và ghi lại khi cỏc vũng quột tương đối ổn định.
* Thực nghiệm đo đỏp ứng dũng của cảm biến
Trong khuụn khổ của luận ỏn, nghiờn cứu tập trung thực hiện phộp đo dũng (amprometric) ứng dụng trong phõn tớch định lượng glucose và cholesterol.
Phõn tớch glucose trờn điện cực Fe3O4/PPy-GOx điện ỏp được đặt vào hệ điện húa là +0,7V, bỡnh điện phõn chứa 5 ml dung dịch PBS 50mM, dung dịch glucose 0,05M được thờm liờn tiếp (injection) vào trong bỡnh điện phõn sau khi cường độ dũng đạt được 90% giỏ trị cõn bằng. Đồ thị mụ tả mối tương quan giữa đỏp ứng dũng và thời gian được ghi lại liờn tục trờn mỏy.
96
Với phõn tớch cholesterol trờn vi điện cực Fe3O4/PANi/PSA-ChOx, điện ỏp được đặt vào hệ điện húa là 0,18 V, bỡnh điện phõn chứa 5 ml dung dịch PBS 50mM, dung dịch cholesterol 1 mM được thờm liờn tiếp (injection) vào trong bỡnh điện phõn sau khi cường độ dũng đạt được 90% giỏ trị cõn bằng. Đồ thị mụ tả mối tương quan giữa đỏp ứng dũng và thời gian được ghi lại liờn tục trờn mỏy.
Từ giỏ trị chờnh lệch cường độ dũng với tớn hiệu nền ứng với tổng nồng độ cơ chất (glucose hoặc cholesterol) được thờm vào hệ điện húa sẽ xõy dựng được đường chuẩn ỏp dụng trong phõn tớch định lượng.