Kiểm nghiệm nguyên liệu Mometasone furoate

Thực hiện theo dƣợc điển Anh 2012 (BP 2012) và tiêu chuẩn nhà sản xuất cung cấp.

3.2.1.1 Cảm quan

Lấy khoảng 5,000 g mẫu thử (nguyên liệu Mometasone furoate) trải mỏng trên một đĩa petri thủy tinh, quan sát bằng mắt thƣờng.

3.2.1.2 Tính tan

Lấy 4 ống nghiệm sạch khô, đánh dấu thứ tự, lần lƣợt thêm mẫu thử và dung môi hòa tan thích hợp theo Bảng 3.1.

Bảng 3.1: Chuẩn bị mẫu khảo sát tính tan của Mometasone furoate

Ống nghiệm 1 2 3 4

Khối lƣợng mẫu thử (g) 0,010 1,000 1,000 0,100

Dung môi hòa tan Nƣớc

(100 mL) Acetone (30 mL) Methylene chloride (30 mL) Ethanol 96% (100 mL) Lắc mỗi ống nghiệm trong vài phút. Để yên. Ghi nhận tính tan.

3.2.1.3 Định tính

 Phổ hồng ngoại (IR)

- Mẫu chuẩn: nghiền nhỏ khoảng 0,002-0,003 g Mometasone furoate chuẩn với khoảng 0,300-0,400 g potassium bromide khan. Cẩn thận nghiền mịn hỗn hợp, trải đều và dập thành viên. Tiến hành đo và ghi nhận phổ đồ.

- Mẫu thử: nghiền nhỏ khoảng 0,002-0,003 g mẫu thử với khoảng 0,300- 0,400 g potassium bromide khan. Cẩn thận nghiền mịn hỗn hợp, trải đều và dập thành viên. Tiến hành đo và ghi nhận phổ đồ.

20

 Sắc ký lớp mỏng

- Dung môi khai triển: H2O:CH3OH:(C2H5)2O:CH2Cl2 = 1,2:8:15:77

- Dung dịch chuẩn và dung dịch thử: pha dung dịch chuẩn và thử ở nồng độ 1 mg/mL trong methylene chloride.

- Tiến hành:

+ Chấm riêng biệt trên bản mỏng 10 L mỗi dung dịch chuẩn và dung

dịch thử. Khai triển bản mỏng trong dung môi khai triển đến khi dung môi đi đƣợc một đoạn khoảng 10 cm. Lấy bản mỏng ra và làm khô trong không khí.

+ Phát hiện A: quan sát dƣới ánh sáng UV 254 nm.

+ Phát hiện B: phun thuốc thử sulfuric acid 20% trong ethanol, nung nóng ở 120ºC trong vòng 10 phút hoặc cho đến khi các vết xuất hiện. Để nguội, quan sát dƣới ánh sáng ban ngày và UV 366 nm.

3.2.1.4 Điểm chảy

Nghiền mẫu thử thành bột mịn (nếu mẫu thử ở dạng tinh thể). Sau đó cho bột vào một ống mao quản, lèn bột bằng cách gõ nhẹ ống mao quản xuống mặt phẳng cứng để có một lớp bột cao 4-6 mm.

Cài đặt nhiệt độ cho máy: nhiệt độ nền: 220ºC, tốc độ gia nhiệt: 1ºC/phút. Khi máy đạt nhiệt độ nền, đặt ống mao quản chứa mẫu thử vào máy. Quan sát và ghi nhận nhiệt độ điểm chảy.

3.2.1.5 Góc quay cực riêng

Cân chính xác 0,250 g mẫu thử cho vào bình định mức 50 mL, hòa tan và pha loãng vừa đủ với cồn tuyệt đối. Lắc đều.

Tiến hành hiệu chỉnh (auto zero) với mẫu trắng là cồn tuyệt đối rồi xác định góc quay cực riêng của mẫu thử.

3.2.1.6 Mất khối lƣợng do làm khô

Sấy khô bì trong tủ sấy ở nhiệt độ 1052ºC trong vòng 30 phút. Lấy ra và để (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

nguội đến nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm chứa silica gel. Cân để xác định khối lƣợng bì.

21

dày không quá 10 mm. Đặt bì chứa mẫu vào tủ sấy ở 1052ºC và sấy cho đến khi

khối lƣợng không đổi.

Cân lại để xác định khối lƣợng mẫu bị mất do làm khô. Khối lƣợng mẫu bị mất do làm khô đƣợc tính theo công thức:

 (%) = (khối lƣợng bì + khối lƣợng mẫu) – (khối lƣợng bì + mẫu)

khối lƣợng mẫu × 100

3.2.1.7 Định lƣợng

- Mẫu chuẩn: cân chính xác 12,5 mg Mometasone furoate chuẩn cho vào bình định mức 25 mL. Hòa tan và pha loãng vừa đủ với ethanol 96%. Lắc đều. Hút chính xác 2 mL dung dịch này cho vào bình định mức 100 mL và pha loãng vừa đủ với ethanol 96%. Lắc đều.

- Mẫu thử: cân chính xác 50 mg mẫu thử cho vào bình định mức 100 mL. Hòa tan và pha loãng vừa đủ với ethanol 96%. Lắc đều. Hút chính xác 2 mL dung dịch này cho vào bình định mức 100 mL và pha loãng vừa đủ với ethanol 96%. Lắc đều.

- Tiến hành đo độ hấp thụ của mẫu chuẩn và mẫu thử ở bƣớc sóng 249 nm. Thực hiện trong cùng điều kiện với mẫu trắng là ethanol 96%.

Hàm lƣợng Mometasone furoate trong mẫu thử đƣợc tính theo công thức:

% Mometasone furoate = AT × mC (tinh khiết) × 100 × 100

AC × mT × 25

Trong đó: AT là độ hấp thụ của mẫu thử tại bƣớc sóng 249 nm

AC là độ hấp thụ của mẫu chuẩn tại bƣớc sóng 249 nm

mT là khối lƣợng của mẫu thử (mg)

mC (tinh khiết) là khối lƣợng của chuẩn tinh khiết (mg)

3.2.1.8 Tạp chất liên quan Điều kiện sắc ký: - Cột C18 (25 cm  4,6 mm, 5 m) - Detector: UV - Bƣớc sóng: 254 nm - Nhiệt độ cột: 30ºC - Thể tích tiêm: 20,0 L

22

- Tốc độ dòng: 1,0 mL/phút

- Pha động: acetonitrile:nƣớc = 50:50

Tiến hành:

- Dung môi pha loãng: hỗn hợp gồm 50 mL acetonitrile và 50 mL nƣớc, thêm 0,1 mL acetic acid băng.

- Dung dịch thử: cân chính xác khoảng 20,0 mg mẫu thử cho vào bình định mức 20 mL. Hòa tan trong 4 mL acetonitrile, pha loãng đến vừa đủ với dung môi pha loãng. Lắc đều.

- Dung dịch đối chiếu: pha loãng 1,0 mL dung dịch thử thành 20,0 mL với dung môi pha loãng. Lắc đều. Hút chính xác 1 mL dung dịch này cho vào bình định mức 10 mL, pha loãng vừa đủ với dung môi pha loãng. Lắc đều.

- Lọc mẫu trắng, dung dịch đối chiếu và dung dịch thử qua giấy lọc 0,45

m.

- Tiêm mẫu trắng, dung dịch đối chiếu và dung dịch thử vào hệ thống sắc ký. Ghi nhận sắc ký đồ. Tính toán phần trăm mỗi tạp riêng lẻ trong dung dịch thử rồi so sánh với các mức chất lƣợng sau:

+ Tạp riêng lẻ bất kỳ: không quá 0,6 lần diện tích peak chính của dung dịch đối chiếu (0,3%). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

+ Tổng tạp: không quá 1,2 lần diện tích peak chính của dung dịch đối chiếu (0,6%).

+ Giới hạn bỏ qua: 0,1 lần diện tích peak chính của dung dịch đối chiếu (0,05%).

Phần trăm mỗi tạp riêng lẻ trong dung dịch thử đƣợc tính theo công thức:

% tạp riêng lẻ = STạp

SĐC ×0,5

Trong đó: STạp là diện tích peak trung bình của mỗi tạp riêng lẻ trong

dung dịch thử

SĐC là diện tích peak trung bình của Mometasone furoate

23