b. Tối −u hóa
3.2. Tuyển chọn chủng vi khuẩn Acetobacter thuần khiết
Việc tìm kiếm những chủng Acetobacter thuần khiết đ−ợc tiến hành theo 2 b−ớc sau:
B−ớc 1: Thử khả năng sinh axit axetic của các chủng nghiên cứu trên môi tr−ờng Blue Bromphenol.
Từ 28 chủng Acetobacter ( KN1- KN10, H1- H12, NH1- NH6 ) hiện có trong tổ bộ môn vi sinh (nguồn giống thu đ−ợc từ luận văn thạc sỹ khoa học của thạc sỹ Đặng Thị Hồng, 2007) và 25 chủng phân lập đ−ợc, chúng tôi đã tiến hành tuyển chọn vi khuẩn thuộc chi Acetobacter.
Kết quả cho thấy: trong môi tr−ờng có Blue Bromphenol 0,04% các chủng Acetobacter đều có khả năng chuyển hoá r−ợu etylic thành axit axetic làm môi tr−ờng chuyển từ màu xanh lục sang màu vàng. Điều này có thể đ−ợc giải thích nh− sau: Blue Bromphenol là một chỉ thị màu hữu cơ, bản thân phân tử có màu vàng, ion âm có màu lam hằng số điện phân K = 10-4,23. Khi dung dịch có pH = 4,23 thì tỷ số giữa phân tử màu vàng và ion màu lam là 1, lúc đó nồng độ của chúng là nh− nhau, dung dịch có màu lục. Khi sử dụng môi tr−ờng nuôi cấy có pH >4,6 thì số ion màu lam tăng, không nhìn thấy các phân tử màu vàng, dung dịch có màu lam (hình 3.2)
Khóa luận tốt nghiệp K31 Khoa Sinh - KTNN
Hình 3.2. Chuyển hoá r−ợu etylic thành axit axetic của vi khuẩn axetic
Sau một thời gian nuôi cấy, pH môi tr−ờng giảm, phân tử màu vàng tăng dần, dung dịch nuôi cấy có màu vàng.
B−ớc 2: Thử khả năng oxy hoá axit axetic thành CO2 và H2O
Trong môi tr−ờng có chứa canxi axetat, 53 chủng vi khuẩn tuyển chọn đều có khả năng sử dụng muối axetat làm nguồn cacbon hay nói cách khác chúng có khả năng oxy hoá axit axetic thành CO2, H2O và giải phóng năng l−ợng ATP, cung cấp cho mọi hoạt động sống của tế bào, đồng thời giải phóng Ca2+ tạo vòng phân giải không màu xung quanh khuẩn lạc (Hình 3.3) theo ph−ơng trình sau:
Ca(CH3COO)2 + O2 → CaCO3 ↓ + CO2 + H2O
Khóa luận tốt nghiệp K31 Khoa Sinh - KTNN
Dựa vào kết quả nghiên cứu trên chúng tôi đi đến nhận xét: 53 chủng vi khuẩn phân lập đều thuộc chi Acetobacter, họ Acetobacteriaceae, vì chúng đều có khả năng chuyển hoá r−ợu etylic thành axit axetic và oxy hoá axit axetic thành CO2 và H2O, điều này không thể xảy ra ở giống Gluconobacter [20], [23].
Hình 3.3. Khả năng oxy hoá axetat của vi khuẩn axetic
Khóa luận tốt nghiệp K31 Khoa Sinh - KTNN