2.4.4.1.Kiểm tra sự phù hợp của hệ thống
Là độ chính xác của thiết bị, được xác định bằng cách đo lặp lại nhiều lần trên cùng một mẫu đã được xử lý xong.
Cách xác định: Tiến hành tiêm lặp lại 6 lần dung dịch chuẩn đã chuẩn bị ở trên, ghi lại các giá trị về thời gian lưu, diện tích pic. Độ lặp lại của hệ thống được biểu thị bằng độ lệch chuẩn tương đối RSD.
2.4.4.2. Tính đặc hiệu
Tính đặc hiệu là khả năng đánh giá một cách rõ ràng chất cần phân tích khi có mặt các thành phần khác như tạp chất hoặc các chất cản trở khác.
Trong HPLC, tính đặc hiệu thể hiện: Trên sắc ký đồ thu được từ mẫu trắng và các mẫu tự tạo, pic của chất cần phân tích tách hoàn toàn với các pic tạp.
Tiến hành:
Chuẩn bị các mẫu sau: - Mẫu trắng
- Mẫu chuẩn pha trong MeOH - Mẫu thử pha trong MeOH
So sánh các sắc ký đồ thu được từ việc phân tích các mẫu trên.
Yêu cầu: tại thời gian lưu của chất chuẩn không xuất hiện pic lạ trên mẫu trắng, mẫu nền.
2.4.4.3. Độ lặp lại của phương pháp
Độ lặp lại của một phương pháp pháp phân tích là mức độ thống nhất giữa các kết quả riêng biệt khi quy trình phân tích được áp dụng lặp đi lặp lại nhiều lần trên cùng một mẫu đồng nhất.
Độ lặp lại được biểu thị bằng giá trị RSD Tiến hành:
- Phân tích 1 mẫu 6 lần song song
- Xác định kết quảđịnh lượng theo đường chuẩn, tiến hành trong cùng điều kiện.
- Tính độ lặp lại bằng cách tính độ lệch chuẩn tương đối giữa giá trị của các lần định lượng.
2.4.4.4.Xác định khoảng nồng độ tuyến tính
Độ tuyến tính của một phương pháp phân tích: là sự phụ thuộc tuyến tính giữa đại lượng đo được (y) và nồng độ chất cần phân tích (x) trong khoảng xác định. Nó được biểu thị bằng phương trình hồi quy y = ax + b và hệ số tương quan r.
Cách xác định: khảo sát trên 1 dãy chất chuẩn có nồng độ biến thiên.
Xác định sự phụ thuộc tuyến tính giữa nồng độ và diện tích pic bằng phương trình hồi quy tuyến tính.
Yêu cầu: Hệ số tương quan r > 0,995.
2.4.4.5.Độđúng
Là mức độ sát gần các giá trị tìm thấy trong phân tích so với giá trị thực. Cách xác định: Tiến hành pha 1 dung dịch chuẩn, 6 dung dịch thử riêng biệt theo quy trình chuẩn bị dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Thêm vào một mẫu thử một lượng chất chuẩn sao cho tổng nồng độ của chúng vẫn nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát. Độđúng sẽđược tính bằng tỷ lệ phần trăm giữa lượng chất chuẩn tìm được so với lượng chất chuẩn thêm vào.
Yêu cầu: Độ tìm lại: 95% -105%
2.4.4.6. Giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định lượng LOQ
Xác định LOD và LOQ dựa vào tỷ lệđáp ứng so với nhiễu đường nền (S/N), tỉ lệ S/N được tiến hành bằng cách so sánh đáp ứng của mẫu trắng từđó tính được nồng độ tối thiểu của chất phân tích có thể phát hiện được.
Tiến hành: Pha loãng dung dịch chuẩn từ nồng độ ban đầu đến nồng độ thấp nhất có thể phát hiện được bằng sắc ký sao cho vẫn nằm trong khoảng tuyến tính.
- LOD được xác định bằng nồng độ tối thiểu của chất phân tích tại đó cho các pic có tín hiệu bằng 3 lần nhiễu đường nền (S/N =3).
- LOQ là nồng độ chất phân tích tại đó có tín hiệu gấp 10 lần nhiễu đường nền (S/N = 10).
(adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});