Phương phỏp kiểm tra hỡnh thỏi dưới kớnh hiển vi quang học: Làm tiờu bản và nhuộn Gram, xem dƣới kớnh hiển vi điện quang học ở vật kớnh 100.
Hỡnh 11: Vi khuẩn Clostridium spp. dƣới kớnh hiển vi quang học ở vật kớnh 100
Hỡnh 12: Bào tử vi khuẩn đƣợc xem dƣới kớnh hiểm vi quang học ở vật kớnh 100
Kiểm tra phản ứng sinh catalates của vi khuẩn
26
Kiểm tra chỉ tiờu sinh húa bằng phản ứng sinh húa với bộ kit API 20A: Sau khi ria cấy cỏc khuẩn lạc nghi ngờ của cỏc chủng vi khuẩn Clostridium
trờn thạch mỏu, ta chọn những khuẩn lạc thuần. Tiến hành kiểm tra và đọc kết cỏc đặc tớnh quả sinh húa trong bộ kit API 20A theo bảng định danh vi khuẩn yếm khớ (Bio-Mộrieux, Phỏp).
Hỡnh 14: Kết quả sinh húa trong bộ kit API 20A
3.3.4 Phương phỏp kiểm tra độ nhạy cảm của vi khuẩn Clostridium spp. phõn lập được với khỏng sinh
Sử dụng phƣơng phỏp khuếch tỏn trờn đĩa thạch của Bauer và ctv (1966), dựa trờn đƣờng kớnh vũng vụ khuẩn.
Bảng 7: Đỏnh giỏ mức độ nhạy cảm của vi khuẩn với một số loại khỏng sinh
STT Loại khỏng sinh Hàm lƣợng Đƣờng kớnh vũng vụ khuẩn (mm) Khỏng thuốc Mẫn cảm trung bỡnh Mẫn cảm cao 1 Trimethoprime/ Sulfamethoxazol 1.25/23,75μg ≤10 11-15 ≥16 2 Penicillin 10UI ≤14 ≥15 3 Tetracycline 30μg ≤14 15-18 ≥19 4 Erythromycin 15μg ≤13 14-22 ≥23 5 Norfloxacin 10μg ≤12 13-16 ≥17
Mụi trường làm khỏng sinh đồ: Là mụi trƣờng MHA (Mueller Hinton Agar), pH của mụi trƣờng phải là 7,2-7,6. Mụi trƣờng đƣợc khử trựng hấp ƣớt ở 1210C trong 15 phỳt. Để nguội 600C rồi đổ ra đĩa petri sao cho bề dày của thạch khoảng 4mm.
Vi khuẩn thớ nghiệm: Chuẩn bị canh trựng cú độ đục tƣơng đƣơng ống MacFarland 0,5%.
Phương phỏp thực hiện khỏng sinh đồ: Dựng tăm bụng vụ trựng nhỳng vào canh trựng đó chuẩn bị, ộp hết nƣớc trờn thành ống nghiệm, trải đều vi khuẩn lờn mặt thạch MHA. Chờ cho mặt thạch khụ dựng kẹp vụ trựng gắp cỏc đĩa khỏng sinh đặt lờn mặt thạch, đĩa cỏch nhau 2,5-3,5 cm và cỏch rỡa đĩa thạch 2 cm. Đĩa đƣợc ủ trong tủ ấm CO2 với tỉ lệ 10% CO2 ở 370C trong 24 giờ và đọc kết quả.
27
Đọc kết quả bằng cỏch đo đƣờng kớnh vũng vụ khuẩn, rồi so sỏnh theo bảng tiờu chuẩn (bảng 7) để đỏnh giỏ mức độ nhạy của vi khuẩn với một số loại khỏng sinh.