PHƢƠNG PHÁP
Do không tìm đƣợc đủ các chất chuẩn tƣơng ứng với các chất phân lập đƣợc nên chúng tôi phải tạm sử dụng các chất phân lập đƣợc dùng làm chất đối chiếu để xây dựng phƣơng pháp.
Các chất phân lập đƣợc này trƣớc khi tiến hành đo các phổ để xác định cấu trúc đã đƣợc kiểm tra độ tinh khiết bằng sắc ký lớp mỏng. Ngoài ra độ tinh khiết của các hợp chất này đƣợc kiểm tra thêm bằng cách xác định tổng
55
tạp theo phƣơng pháp chuẩn hóa diện tích. Với dung dịch kiểm tra có nồng độ đủ lớn và thời gian sắc ký là 30 phút, các hợp chất phân lập đƣợc từ cây Cỏ Seo gà đều cho một píc duy nhất trên sắc ký đồ và không xuất hiện pic lạ nào khác. Chứng tỏ các chất phân lập đƣợc khá tinh khiết.
Tuy nhiên để thiết lập chất đối chiếu với các chất này yêu cầu phải có lƣợng chất phân lập đủ lớn để xác định hàm ẩm, hàm lƣợng thực tế và kiểm tra độ ổn định theo thời gian. Thực tế lƣợng các chất phân lập đƣợc còn quá ít và thời gian không cho phép để thực hiện các công việc trên. Do vậy chúng tôi tạm thời coi hàm lƣợng của các hợp chất trên là 100% để nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp phân tích.
Nếu hàm lƣợng thật của các chất đối chiếu thấp hơn (do còn độ ẩm và độ tinh khiết không đạt 100%) thì nồng độ của các dung dịch chất đối chiếu cũng sẽ giảm theo một tỷ lệ tƣơng ứng. Đồng thời giới hạn phát hiện và giới hạn định lƣợng có thể còn đạt đƣợc giá trị thấp hơn.