D. Độ lặp lại của phương pháp
j. Định tính sự có mặt các vị thuốc trong cao thuốc bằng SKLM:
Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: Cân số gam dược liệu đã được tán nhỏ thành bột tương ứng có trong 1g cao đặc.
- Bá bệnh; Ba kích; Cốt khí củ 0,33g - Đương quy; Hoàng kỳ 0,46g - Xà sàng tử; Bạch tật lê 0,40g
- Câu kỷ tử 0,53g
- Cho riêng mỗi vị dược liệu vào bình nón, ngâm trong ethanol 96%, 3 lần, mỗi lần 10ml trong 1 giờ, gạn lấy dịch, lọc, lấy dịch lọc đem bốc hơi dung môi còn 1 ml để chấm sắc ký của từng vị dược liệu.
- Lấy 1 g cao đặc, ngâm trong 30ml ethanol 96% trong 3 giờ, lọc, lấy dịch lọc đem bốc hơi dung môi còn 2 - 3 ml, được dịch chấm sắc ký của cao đặc.
- Bản mỏng Silicagel GF254, hoạt hóa ở 1050C trong 1 giờ.
- Hệ dung môi triển khai: Mỗi vị dược liệu tiến hành khảo sát trên nhiều hệ dung môi, chon hệ tách vết rõ, có khả năng nhận biết được vị thuốc trong cao đặc bài thuốc để ghi lại kết quả.
- Triển khai sắc ký: Chấm riêng 2 vết dịch chiết dược liệu và cao đặc trên cùng một bản mỏng với cùng một thể tích 10 µl, để khô, chạy sắc ký đến vạch giới hạn dung môi (cách mép trên 0,5cm), lấy ra, để khô ở nhiệt độ phòng. Hiện vết dưới ánh sáng tử ngoại ở bước sóng 254 nm và 365 nm.
- Hệ dung môi: (có thể điều chỉnh tỷ lệ nếu cần) Bá bệnh: Cloroform : ethylacetat (7:3) Bạch tật lê: Cloroform : methanol (19:1) Xà sàng tử: Cloroform : ethylacetat (9:1)
61
Đương quy: Cyclohexan : ethylacetat : aceton (7:2:1) Hoàng kỳ: Cloroform : methanol (19:1)
Cốt khí củ: Toluen : chloroform : aceton (4:2,5:3,5)
Câu kỷ tử: Toluen : ethylacetat : aceton : acid formic (5:2:2:1) Ba kích: Toluen : ethylacetat : acid formic (8:2:0,1)
- Yêu cầu : Sắc ký đồ của cao đặc phải có các vết (2 đến 3 vết) cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết trên sắc ký đồ của vị dược liệu.