Có hai cách chiết:
Cách 1: Cân chính xác khoảng 5,00 g mẫu đã đồng nhất bằng cân phân tích cho vào ống ly tâm dung tích 50 ml, thêm 10 ml methanol có mặt H3PO4, lắc trong 1 phút bằng máy lắc xoáy, sau đó rung siêu âm trong 20 phút. Ly tâm ở tốc độ 5000 vòng/phút trong 5 phút. Gạn lấy dịch trong vào bình định mức 25 ml. Tiếp tục chiết lặp lại lần 2 với 10 ml methanol có mặt H3PO4. Gộp dịch chiết và định mức đến 25 ml bằng methanol có mặt H3PO4. Lọc dịch chiết qua màng lọc 0,45 µm rồi chuyển vào lọ mẫu và tiêm vào hệ thống HPLC[1].
Cách 2: Cân 5,00 g mẫu đã đồng nhất ở trên bằng cân phân tích vào ống ly tâm dung tích 50 ml. Thêm 10 ml acetonitril có mặt H3PO4, lắc đều trong 2 - 3 phút bằng máy lắc xoáy (vortex), tiếp theo siêu âm trong 20 phút. Sau đó ly tâm ở tốc độ 5000 vòng / phút trong 5 phút. Gạn lấy dịch trong vào bình định mức 25 ml. Tiếp tục chiết lặp lại lần 2 với 10 ml acetonitril có mặt H3PO4. Gộp dịch chiết và định mức đến 25 ml bằng acetonitril có mặt H3PO4. Lọc dịch chiết qua màng lọc 0,45 µm rồi chuyển vào lọ mẫu và tiêm vào hệ thống HPLC.
Tiến hành khảo sát một số qui trình chiết nhƣ sau: bằng hai dung môi methanol (MeOH) và acetonitril (ACN) và có mặt axit photphoric (H3PO4).
Bảng 2.1: Các hệ dung môi chiết trên nền mẫu tinh bột gạo.
Qui trình chiết Dung môi chiết
E1 MeOH
E11 1% H3PO4 trong MeOH E12 2% H3PO4 trong MeOH E13 3% H3PO4 trong MeOH E14 3,5% H3PO4 trong MeOH
E15 4% H3PO4 trong MeOH
E2 ACN
E21 1% H3PO4 trong ACN E22 2% H3PO4 trong ACN E23 3% H3PO4 trong ACN E24 3,5% H3PO4 trong ACN E25 4% H3PO4 trong ACN