Kiểm tra tính nhạy của kháng sinh đối với các vi khuẩn nhƣ: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, E.coli dựa trên nguyên tắc kháng sinh từ đĩa giấy sẽ khuếch tán làm ức chế vi sinh vật kiểm nghiệm, từ đó sẽ tạo nên vòng vô khuẩn quanh đĩa giấy kháng sinh.
Môi trƣờng
Môi trƣờng tiêu chuẩn là môi trƣờng MHA. Bề dày của thạch khoảng 4mm, pH từ 7,2 đến 7,6 ở nhiệt độ phòng thí nghiệm.
Chuẩn bị canh khuẩn:
Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, E.coli đã qua phản ứng sinh hóa dƣơng tính, đƣợc cấy thuần trên môi trƣờng NA, chuyển khuẩn lạc vào ống có chứa 9ml nƣớc muối sinh lý 9%o sao cho canh khuẩn có độ đục tƣơng đƣơng độ đục ống chuẩn Mc. Farland 0,5 (tƣơng đƣơng 10 8
CFU/ml).
Các đĩa kháng sinh: Cequinome, Ceftiofur, Marbofloxacin, Doxycycline,
Florfenicol, Fosfomycin, Gentamycin, Enrofloxacin, Norfloxacin, Danofloxacin. Phƣơng pháp làm kháng sinh đồ
Dùng Micropipet hút 100 µl canh khuẩn cho vào đĩa thạch, dùng cây tran trang đều vi khuẩn trên mặt thạch MHA tran đến khi mặt thạch khô, dùng kẹp vô trùng lấy các đĩa kháng sinh đặt lên mặt thạch. Khi đặt phải đè nhẹ để đĩa kháng sinh tiếp xúc hoàn toàn với mặt thạch. Khi đặt đĩa kháng sinh ta phải đảm bảo các đĩa không gân nhau dƣới 24mm. kháng sinh khuếch tán ngay sau khi đĩa kháng sinh chạm vào mặt thạch. Vì vậy khi đặt phải chính xác và không dời đổi các đĩa kháng sinh. Ủ đĩa thạch ở 37o
C, sau 16 – 24 giờ sau đó đọc kết quả ( Phạm Hùng Vân, 2002). Đọc kết quả kháng sinh đồ.
Kết quả kháng sinh đƣợc kết luận bằng cách so sánh với bảng đƣờng kính chuẩn ở bảng 7 và 8
34
Bảng 8: Đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số kháng sinh đối với vi khuần Staphylococcus aureus và Streptococcus agalatiae (NCCLS, 2004; CLSI, 2012) Kháng sinh Kí hiệu Hàm lƣợng kháng sinh/ đĩa (µg) Đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm) Kháng (≤) Trung bình Nhạy (≥) Ceftiofur Xnl 30 17 18-20 21 Cefquinome C10 10 15 16-21 22 Marbofloxacin Mar 5 14 15-19 20 Doxycycline Do 30 12 13-15 16 Florfenicol Ffc 30 14 15-18 19 Fosfomycin Fos 50 12 13-15 16 Gentamycin Ge 10 12 13-14 15 Enrofloxacin Enr 5 16 17-22 23 Norfloxacin Nr 10 12 13-16 17 Danofloxacin Dn 30 12 13-15 16
Bảng 9: Đƣờng kính vòng vô khuẩn chuẩn của một số kháng sinh đối với vi khuần E.coli (NCCLS, 2004; CLSI, 2012)
Kháng sinh Kí hiệu Hàm lƣợng kháng
sinh/ đĩa (µg) Đƣờng kính vòng vô khuẩn (mm)
Kháng (≤) Trung bình Nhạy (≥) Ceftiofur Xnl 30 17 18-20 21 Cefquinome C10 10 15 16-21 22 Marbofloxacin Mar 5 14 15-19 20 Doxycycline Do 30 10 11-13 14 Florfenicol Ffc 30 14 15-18 19 Fosfomycin Fos 50 12 13-15 16 Gentamycin Ge 10 12 13-14 15 Enrofloxacin Enr 5 16 17-22 23 Norfloxacin Nr 10 12 13-16 17 Danofloxacin Dn 30 10 11-13 14
35