Mẫu sau khi đƣợc sơ chế đƣợc chuyển sang công đoạn xử lý mẫu. Quy trình xử lý mẫu bao gồm các công đoạn chiết tách và làm sạch đƣợc mô tả trong hình 2.4.
37
Hình 2.4. Quy trình chiết tách và làm sạch mẫu đất
Chiết siêu âm
Tiến hành chiết siêu âm mẫu đất với khối lƣợng cân thích hợp (5g) trong dung dịch 5% H2SO40,1M/aceton trong 15 phút. Sau đó hút 5 mL dich chiết sang ống nghiệm 40 mL, bổ xung dung dịch NaCl 5% và 2 mL hexan, tiến hành chiết lắc 2 phút để thu dịch chiết n-hexan.
Làm sạch dịch chiết
Dịch chiết mẫu đƣợc tiến hành làm sạch trên thiết bị làm sạch bán tự động SZ-DXN-PT050. Quy trình làm sạch đƣợc mô tả trong hình 2.4.
38
Hình 2.5. Quy trình làm sạch mẫu bằng hệ làm sạch bán tự động
Phân tích bằng CALUX
Dịch chiết mẫu sau khi làm sạch đƣợc sử dụng cho quá trình phân tích CALUX. Các chất dioxin/furan đƣợc định lƣợng dựa trên đƣờng chuẩn tƣơng quan giữa giá trị ln[TCDD*100] và đơn vị ánh sáng tƣơng đối RLU. Đƣờng chuẩn đƣợc xây dựng từ các dung dịch chuẩn 2,3,7,8-TCDD ở các nồng độ khác nhau và kiểm tra độ chính xác của đƣờng chuẩn bằng dung dịch kiểm chứng QC. [45]
39
Hình 2.6. Quy trình thí nghiệm CALUX
Các bƣớc chuẩn bị cho phân tích đo mật độ quang bao gồm:
- Chuẩn bị mẫu: mẫu sau khi làm sạch đƣợc pha loãng ở các tỉ lệ 1, 1/5 và 1/25 trong dung môi DMSO.
- Tạo môi trƣờng nuôi cấy: các mẫu sau khi pha loãng ở các tỉ lệ khác nhau đƣợc pha loãng tiếp 100 lần trong môi trƣờng nuôi cấy là media RPMI1640.
- Phơi nhiễm tế bào: cho mẫu vào các giếng chứa tế bào. Tiến hành ủ ở 37oC trong 19-24 giờ.
- Đo huỳnh quang xác định nồng độ TEQ tổng của chất trong mẫu.
Tính toán kết quả
Sau khi đo huỳnh quanh, kết quả đƣợc tính toán và xử lý bởi phần mềm chuyên dụng.
Quy trình xử lý số liệu phân tích nhƣ sau: Từ số liệu đo mật độ ánh sáng tƣơng đối (RLU- Relative Light Unit)→Hiệu chỉnh số liệu theo giá trị RLUmax→Tính toán kết quả theo đƣờng chuẩn sự phụ thuộc của RLU vào nồng độ chất 2,3,7,8-TCDD.
40
CHƢƠNG 3 –KẾT QUẢ, THẢO LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT GIẢI PHÁP XỬ LÝ DIOXIN