Dựa vào bản chất của các chất phân tích, bản chất của đối tượng mẫu cũng như
tham khảo một số tài liệu, chúng tôi nghiên cứu một sốđiều kiện như sau:
- Pha tĩnh: tiến hành thử nghiệm trên hai cột sắc ký đều có bản chất C18 pha ngược + Cột Symmetry (250mm x 4,6mm; 5,0 µm) và tiền cột tương ứng (Waters). + Cột XBridge (150mm x 2,1mm; 3,5 µm) và tiền cột tương ứng (Waters). - Pha động: sử dụng gradient giữa dung môi hữu cơ và dung dịch acid hữu cơ
+ Dung môi hữu cơ: thử nghiệm Acetonitril và Methanol.
+ Dung dịch acid hữu cơ: thử nghiệm nước cất có chứa 0,1% các acid: acid acetic (AA) , acid formic (FA) , acid trichloacetic (TCA) và acid trifloacetic (TFA) - Một số thống số HPLC khác được lựa chọn:
+ Thể tích tiêm mẫu 20µl, nhiệt độ buồng cột 350C
+ Tốc độ dòng 0,5 ml/phút cho cột XBridge và 1,0 ml/phút cho cột Symmetry.
- Kết quả sau khi tiến hành khảo sát, thử nghiệm và lựa chon được như sau: + Gradient pha động khi sử dụng cột Symmetry:
Bảng 3.3 Gradient pha động khi sử dụng cột Symmetry
Thời gian (phút) Acetonitril (FA 0,1%) H2O (FA 0,1%)
Bắt đầu 20% 80% 1,0 20% 80% 7,0 50% 50% 7,5 100% 0% 8,5 100% 0% 9,0 20% 80% 12,0 20% 80%
+ Gradient pha động khi sử dụng cột XBridge:
Bảng 3.4 Gradient pha động khi sử dụng cột XBridge
Thời gian (phút) Acetonitril (FA 0,1%) H2O (FA 0,1%)
Bắt đầu 20% 80%
1,0 50% 50%
7,0 70% 30%
7,5 20% 80%
10,0 20% 80%
- Nhận xét: Cột Symmetry là loại cột thông dụng, được sử dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm còn cột XBridge đang được ứng dụng trong các thế hệ máy
sắc ký mới. Chúng tôi đã xác định điều kiện phân tích trên cả 2 loại cột này để
thuận lợi hơn cho việc triển khai phương pháp về sau.