Trên hệ thống LC-MS/MS, với mỗi chất phân tích lựa chọn được ít nhất 01 ion mẹ và 02 ion con, một ion con để định lượng, một ion con để định tính.
Tiến hành phân tích mẫu trắng, mẫu dung dịch chuẩn và mẫu trắng thêm chuẩn theo các điều kiện LC-MS/MS đã lựa chọn được. Kết quả phải đạt như sau: - Trên sắc đồ mẫu trắng không xuất hiện các pic có cùng thời gian lưu với pic của các chất phân tích trên sắc đồ mẫu dung dịch chuẩn và mẫu trắng thêm chuẩn. - Trên sắc đồ mẫu trắng thêm chuẩn có các pic có thời gian lưu tương tự như
trên sắc đồ của dung dịch chuẩn.
b. Xác định tính thích hợp của hệ thống
Tiến hành phân tích lặp lại ít nhất 06 lần dung dịch chuẩn trên hệ thống LC- MS/MS theo các điều kiện đã lựa chọn được như trên. Tính toán độ lệch chuẩn tương đối (RSD %) của các giá trị thời gian lưu (tR) và diện tích pic (tỉ lệ diện tích píc nếu sử dụng nội chuẩn). Các giá trị RSD phải nhỏ hơn 2%.
c. Khảo sát khoảng tuyến tính
Để xác định khoảng tuyến tính của phương pháp, thực hiện phân tích dãy chuẩn với ít nhất 5 nồng độ pha từ 1ppb đến 500ppb. Nếu đồ thị tuyến tính trong khoảng nồng độ này (R2 ≥ 0,995) thì chấp nhận dãy nồng độ này, nếu không phải tiến hành phân tích lại dãy chuẩn hoặc thu hẹp dải nồng độ cho đến khi R2 ≥ 0,995.
d. Giới hạn phát hiện LOD và giới hạn định lượng LOQ
- Giới hạn phát hiện (LOD) là nồng độ nhỏ nhất trong dãy chuẩn có chiều cao pic trung bình cao ít nhất gấp 3 lần chiều cao pic của mẫu trắng. Giới hạn định lượng (LOQ) là nồng độ nhỏ nhất trong dãy chuẩn có chiều cao pic trung bình cao gấp 10 lần chiều cao pic của mẫu trắng, nghĩa là LOQ ≈ 3,3LOD
e. Độ lặp lại của phương pháp
Để thử nghiệm độ lặp lại của phương pháp, tiến hành phân tích mẫu theo các
trắng thêm chuẩn ở nồng độ xác định, tiến hành phân tích đồng thời ít nhất là 06 lần. Tính toán độ lặp lại của kết quả kết quả thu được thông qua độ lệch chuẩn SD và độ lệch chuẩn tương đối RSD theo các công thức sau:
( )2 1 − − = ∑ n X Xi SD (%) = ×100 X SD RSD
Trong đó: SD: độ lệch chuẩn ; Xi: kết quả thu được trên mẫu thứ i X là kết quả trung bình của n lần
f. Độ thu hồi của phương pháp
Để thử nghiệm độ lặp lại của phương pháp, tiến hành phân tích mẫu theo các
điều kiện LC-MS/MS và quy trình xử lí mẫu đã lựa chọn được ở trên. Sử dụng mẫu trắng thêm chuẩn ở nồng độ xác định, tiến hành phân tích đồng thời ít nhất là 06 lần Tính toán kết quả thu được của độ thu hồi theo công thức như sau:
= ×100
Spike X
X
R
Trong đó: R : độ thu hồi trung bình ; X là kết quả trung bình của n lần XSpike: nồng độ của dung dịch mẫu thêm chuẩn.