Phân đoạn I có khối lượng m = 0,519 g, có 3 vết rõ: 1 vết màu vàng, 1 vết màu nâu và 1 vết màu xanh. Sắc ký cột lần 2 với mong muốn phân lập được chất tinh khiết.
Đường kính và chiều dài cột: d = 1 cm, l = 45 cm. Khối lượng silica gel: 10 g.
Dung môi khởi đầu là PE, tăng dần PE : Ea theo tỷ lệ 99 : 1, 98 : 2, 97 : 3, 96 : 4, 95 : 5, 94 : 6, 93 : 7, 92 : 8, 91 : 9, 9 : 1, 8 : 2, 7 : 3. SKLM với hệ dung PE : EA = 8 : 2 gom chung phân đoạn giống nhau.
Bảng4.9: Kết quả sắc ký cột phân đoạn I
Phân đoạn Kết quả SKLM Dạng chất Khối lượng (g) I1 1 vết còn lẫn tạp Sáp có màu xanh 0,026
I2 Vết tạp Sáp màu vàng 0,029
I3 2 vết dơ Tinh thể trắng 0,093
I4 1 vết nâu Tinh thể trắng 0,109
Khối lượng tổng cộng các phân đoạn I: 0,395 g.
Thu suất quá trình sắc ký cột cao PE: .100 76,1% 519 , 0 395 , 0 H . Hình 4.8: SKLM phân đoạn I, I4 và I5 Phân đoạn I4
Sau khi sắc ký lần 2 được phân đoạn I4 chất dạng timh thể màu trắng tương đối sạch. SKLM với 3 hệ dung môi khác nhau được vết gọn và không lẫn tạp, tạm gọi chất này là PHUOC_NS1, tôi quyết định chọn gửi phổ.
Hình 4.9: SKLM hợp chất PHUOC_NS1 với 3 hệ dung môi khác nhau
Phân đoạn I5:
Sau khi sắc ký lần 2 được phân đoạn I5, chất dạng tinh thể màu trắng tương đối sạch. Khảo sát với 3 hệ dung môi khác nhau thu được vết gọn, không lẫn tạp chất. Không có hoạt tính UV ở bước sóng 254 nm và 356 nm. Tạm gọi là PHUOC_NS2 và gửi phổ chất này.
Ba hệ dung môi:
Bảng 1: PE : C = 1 : 1 Bảng 2: DC
Hình 4.10: SKLM hợp chất PHUOC_NS2 với 3 hệ dung môi khác nhau