Kỹ thuật chiết lỏng − lỏng thường được áp dụng để:
- Chiết hợp chất cần quan tâm ra khỏi dung dịch ban đầu.
- Phân chia cao alcol thô ban đầu có chứa quá nhiều loại hợp chất từ không phân cực đến rất phân cực thành những phân đoạn có tính phân cực khác nhau.
Nguyên tắc: Dung môi không phân cực như: Petroleum ether, hexane,... sẽ hoà tan tốt các hợp chất không phân cực: Các alcol béo, ester béo,… Dung môi phân cực trung bình như: Diethyl ether, chloroform,… sẽ hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực trung bình chứa nhóm chức ether −O−, aldehyde −CHO, ketone −CO−, ester −COO−,… Dung môi phân cực mạnh như: Metanol, butanol, nuớc,… hòa tan tốt các hợp chất có tính phân cực mạnh chứa các nhóm chức −OH, −COOH,….
Việc chiết lỏng − lỏng được thực hiện bằng bình lóng, trong đó cao alcol thô ban đầu được hoà tan vào pha nước. Sử dụng lần lượt các dung môi hữu cơ, loại không hòa tan với nước hoặc có thể hỗn hợp được với nước để chiết ra khỏi pha nước các hợp chất có tính phân cực khác nhau (tùy vào độ phân cực của dung môi). Tùy vào tỷ trọng so sánh giữa dung môi và nước mà pha hữu cơ nằm ở lớp trên hoặc ở dưới so với pha nước. Việc chiết được thực hiện lần lượt từ dung môi hữu cơ kém phân cực đến dung môi phân cực thí dụ như: petroleum ether hoặc hexane, chloroform, dichloromethane, ethyl acetate,
n−butanol,… Với mỗi loại dung môi hữu cơ, việc chiết được thực hiện nhiều
lần, mỗi lần một lượng nhỏ thể tích dung môi, chiết đến khi không còn chất hòa tan vào dung môi thì đổi sang chiết với dung môi có tính phân cực hơn.
chất làm khan như Na2SO4, MgSO4, CaSO4,… cô quay đuổi dung môi thu được cao chiết. Để kiểm tra xem các hợp chất nào đã được chiết vào pha hữu cơ cũng như các hợp chất nào còn lại ở trong pha nước và chiết bao nhiêu lần thì hoàn tất, có thể sử dụng sắc ký lớp mỏng, trên bản mỏng cần so sánh đồng thời vết của pha nước và của pha hữu cơ. Sự chiết bởi một dung môi cụ thể nào đó được coi là hoàn tất khi lần chiết thứ n, trên bảng mỏng không còn nhìn thấy vết của chất đó trong pha nước cũng như trong pha hữu cơ. Cũng có thể kiểm tra bằng cách nhỏ một giọt dung dịch chiết lần thứ n lên trên một tấm kính sạch, sau khi bay hết dung môi, không còn để lại vết gì trên mặt kính.
Chiết lỏng − lỏng được thực hiện ở nhiệt độ phòng, nếu gia tăng nhiệt độ cho dung môi thì khả năng hòa tan của dung môi sẽ tăng lên và nguyên tắc nêu trên sẽ có nhiều thay đổi.
Lưu ý: Khi thực hiện kỹ thuật chiết lỏng − lỏng do phải lắc bình lóng nhiều lần, nên ở những lần chiết sau dung môi trong bình lóng tạo nhủ tương. Để khắc phục nhược điểm này dùng đũa thủy tinh khuấy nhẹ dung dịch hoặc cọ xát vào thành bình, chổ mặt thoáng của dung dịch nhằm xóa bỏ bọt khí, nhanh chóng phân thành 2 lớp, ngoài ra cũng có thể dùng kỹ thuật chiết pha rắn SPE [18-21].