b. Bảo quản khô
2.2 Định lượng triterpenoid tổng trong nấm Linhchi bằng phương pháp
pháp UV–Vis
Nguyên tắc: phương pháp quang phổ hấp thụ tử ngoại–khả kiến là phương pháp dựa trên việc đo độ hấp thụ bức xạ đơn sắc của dung dịch nghiên cứu ở bước sóng xác định trong vùng tử ngoại khả kiến, rồi so sánh với độ hấp thụ bức xạ đơn sắc của dung dịch tiêu chuẩn có nồng độ xác định, từ đó tính toán được hàm lượng chất nghiên cứu dựa theo đường chuẩn của chất chuẩn.
Theo các công trình nghiên cứu về định lượng triterpenoid tổng thì có thể rút ra các kết luận chung: hỗn hợp vanillin–acetic acid băng và acid perchloric thường được dùng làm chất lên màu trong phản ứng tạo phức, bước sóng hấp thụ cực đại nằm trong khoảng 520–550 nm, để chính xác hơn trong đề tài sẽ tiến hành khảo sát lại bước sóng hấp thụ cực đại trong vùng 190–1100 nm, thời gian cho phản ứng lên màu tối ưu là 15–25 phút (theo Xiang et.al (2001)), một điểm cần lưu ý là phải cho bay hơi hết dung môi trong dịch chiết mẫu và dung dịch chuẩn vì dung môi làm ảnh hưởng đến nền mẫu khi phân tích, chất chuẩn có thể sử dụng là oleanolic acid hoặc là ursolic acid.
Cách tiến hành: Lấy một lượng dịch chiết mẫu (sau khi thực hiện quá trình chiết mẫu) có nồng độ Cx, cho bay hơi hết dung môi, thêm vào hỗn hợp 5% vanillin–acetic acid băng và acid perchloric để thực hiện phản ứng lên màu, ủ hỗn hợp một thời gian để bền màu, định mức bằng acetic acid băng, sau đó đo độ hấp thụ của hỗn hợp ở bước sóng thích hợp trên máy UV–Vis, dựa vào phương trình đường chuẩn của chất chuẩn xác định nồng độ của mẫu, từ đó suy ra hàm lượng triterpenoid tổng có trong mẫu ban đầu.
Một số điều cần lưu ý trong quá trình định lượng:
Cần phải loại bỏ các yếu tố làm ảnh hưởng đến nền mẫu: dung môi, tạp chất.
Xác định được bước sóng tối ưu để độ hấp thụ đạt cực đại. Phải thẩm định phương pháp trước khi đo mẫu.