Khảo sát khả năng hòa tan lân khó tan của các dòng vi khuẩn đã tách ròng bằng cách ria cấy lên môi trường NBRIP đặc. Môi trường này chứa lân khó tan có bổ sung chất chỉ thị màu Bromothymol Blue, làm môi trường chuyển sang màu xanh đối với môi trường bazơ và màu vàng đối với môi trường acid.
Những dòng vi khuẩn có thể tồn tại trên môi trường NBRIP được xem là những vi khuẩn hòa tan lân (PSB) và được tiếp tục kiểm tra chỉ số hòa tan lân PSI bằng phương pháp nhỏ giọt trên môi trường NBRIP đặc. Cách tiến hành như sau:
- Chuẩn bị vi khuẩn gốc: dùng que cấy lấy một phần sinh khối vi khuẩn cho vào ống nghiệm chứa 5ml môi trường LB lỏng (khi lấy mẫu cần lấy đầy loop của que cấy để đảm bảo lượng vi khuẩn được chủng vào môi trường lỏng tương đối đều nhau), ủ ở 27 – 30oC trên máy lắc (350 vòng/phút).
- Sử dụng phương pháp nhỏ giọt để kiểm tra khả năng hòa tan lân trên môi trường NBRIP đặc: chia đĩa môi trường thành 4 phần bằng nhau, chủng vào mỗi phần 4µl vi khuẩn đã nuôi trong môi trường lỏng, để những giọt dung dịch khô sau đó đem ủ 27 – 30oC. Mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần.
- Sau khi ủ 2 – 7 ngày, những vi khuẩn có khả năng hòa tan lân sẽ được nhận diện bởi chúng hình thành vùng sáng là vòng tròn trong suốt xung quanh khuẩn lạc (vòng halo).
- Tiến hành đo đường kính khuẩn lạc và đường kính vòng sáng do vi khuẩn tạo thành để tính chỉ số hòa tan lân PSI dựa trên công thức (Edi-Premono et al., 1996):
Trong đó:
d (khuẩn lạc): đường kính của khuẩn lạc vi khuẩn.
D (vòng sáng): đường kính của vòng sáng quanh khuẩn lạc.
3.4.4. Khảo sát khả năng hòa tan các nguồn lân khác nhau của các dòng vi khuẩn phân lập đượctrong điều kiện phòng thí nghiệm
