hoại tế bào ,,,
- Lấy ngẫu nhiên 3 lọ vắc xin. - Cách thực hiện:
+ Hồi chỉnh lọ vắc xin đông khô với nước hồi chỉnh.
+ Pha loãng ở những nồng độ khác nhau. Mỗi lọ vắc xin sử dụng ba nồng độ thích hợp sao cho tạo được các đám huỷ hoại riêng rẽ trên phiến tế bào. Mỗi lọ vắc xin sử dụng một phiến 6 giếng.
+ Gây nhiễm lên tế bào Vero 2-3 ngày tuổi: 0,1 mL/giếng x 2 giếng/nồng độ,
+ Ủ ở điều kiện 370C, 5% CO2/60 phút để vi rút hấp phụ lên tế bào. + Phủ thạch.
+ Phủ thạch có chứa đỏ trung tính làm chỉ thị màu. + Tiếp tục nuôi cấy ở điều kiện 370C, 5% CO2/3 ngày + Đếm số lượng PFU trên mỗi giếng.
+ Tính công hiệu của từng lọ vắc xin dựa vào số lượng PFU và độ pha loãng. Công hiệu của mỗi lọ vắc xin bằng trung bình công hiệu của 3 nồng độ gây nhiễm. Công hiệu của loạt vắc xin được tính bằng công hiệu trung bình của 3 lọ vắc xin.
Công thức tính công hiệu của mỗi nồng độ pha loãng:
Công hiệu (Lg PFU) = Lg số PFU trung bình 2 giếng + Lg nồng độ pha loãng + 0,7.
Trong đó:
0,7: Lg chuyển đổi từ 0,1 mL vắc xin gây nhiễm/giếng sang 0,5 mL (1 liều)
- Thử nghiệm được tiến hành song song với mẫu chuẩn M01-07.
- Thử nghiệm đạt yêu cầu khi: Công hiệu vắc xin mẫu chuẩn đạt từ 4,2 - 4,6 lg PFU/0,5 mL;
- Tiêu chuẩn đánh giá: Công hiệu của mỗi loạt vắc xin lớn hơn hoặc bằng 3 Lg PFU/liều.