- Về hình thức cảm quan: các công thức sau khi bào chế đều thu được hỗn dịch màu vàng đục, không quan sát thấy các tinh thể dược chất và các tiểu phân có kích thước lớn (hình 3.2). Sau bảo quản 1 ngày ở 2 – 8 ºC không thấy hiện tượng lắng cặn.
Hình 3.2. Hỗn dịch liposome AMB sau khi bào chế
- Quan sát hình ảnh chụp TEM cho thấy, các tiểu phân có cấu trúc hình cầu, đơn hoặc đa lớp, phân bố KTTP tương đối đồng nhất (Phụ lục 2).
- KTTP, phân bố KTTP được trình bày trong bảng 3.5 và đồ thị biểu diễn KTTP và phân bố KTTP của các mẫu được thể hiện ở hình 3.3, 3.4, 3.5.
Bảng 3.5. KTTP và phân bố KTTP của các mẫu liposome AMB
Công thức Zaverage (d.nm) PDI Peak 1 (d.nm) Peak 2 (d.nm) Peak 3 (d.nm) % peak 1 % peak 2 % peak 3 A552 273,3 0,324 466,3 0 0 100 0 0 A642 253,2 0,284 192,6 706,1 0 56,5 43,5 0 A732 246,5 0,249 313,1 5007 0 98,9 1,1 0 A822 200,4 0,23 205,0 1885 4282 89,9 6,3 3,8 A912 167,3 0,24 200,2 4215 0 96,2 3,8 0 B552 246,1 0,262 345,3 0 0 100 0 0 B642 168,7 0,247 174,2 4485 0 93,9 6,1 0 B732 166,4 0,232 184,7 4502 0 95,6 4,4 0 B822 159,8 0,177 201,8 0 0 100 0 0 B912 143,7 0,140 153,6 5117 0 98,9 1,1 0 Sau khi đùn Trước khi đùn
Hình 3.3. Đồ thị biểu diễn KTTP của các mẫu liposome AMB
Hình 3.4. Đồ thị biểu diễn KTTP, phân bố KTTP của các mẫu liposome nhóm A
Nhận xét:
Từ các kết quả thu được ở trên cho thấy với cùng một tỷ lệ dược chất/tổng lượng lipid sử dụng thì:
+ Các mẫu liposome thu được có KTTP nhỏ từ 143,7 – 273,3 nm, khoảng kích thước này lớn hơn nhiều so kích thước của lỗ màng polycarbonat, phân bố KTTP của các mẫu tương đối đồng nhất (PDI < 0,3) trừ công thức A552.
+ KTTP của các mẫu liposome nhóm A sử dụng đệm phosphat pH 7,4 làm môi trường hydrat hóa có xu hướng cao hơn KTTP của các mẫu liposome nhóm B sử dụng đệm phosphat pH 4,0 làm môi trường hydrat hóa.
+ Khi tăng tỷ lệ SPC, giảm tỷ lệ chol thì hỗn dịch liposome thu được có KTTP nhỏ hơn và đồng nhất hơn (giá trị PDI có xu hướng giảm).
Nguyên nhân của hiện tượng trên là do:
Sự có mặt của cholesterol làm cho lớp màng lipip kép trở nên cứng chắc hơn, giảm tính linh động của lớp màng lipid khiến cho các tiểu phân liposome khó đi qua màng polycarbonat trong quá trình đùn ép giảm KTTP. Điều này còn dẫn đến việc khi tăng tỷ lệ cholesterol thì lực nén tác động để đẩy hỗn dịch liposome qua màng polycacbonat tăng, làm giảm tính chất nguyên vẹn của lớp màng lọc. Thêm vào đó, sự có mặt của kết tủa AMB trong hỗn dịch cũng cản trở quá trình đùn do làm bít tắc các lỗ màng và ảnh hưởng đến kết quả đo.
Kết quả phân tích DSC các mẫu liposome A552 và A912 có tỷ lệ chol khác nhau cho thấy không còn xuất hiện peak nhiệt độ chuyển pha của SPC trên phổ DSC (phụ lục 4). Chứng tỏ sự có mặt của dược chất trong lớp màng lipid kép làm mất nhiệt độ chuyển pha (Tc) của SPC. Hiện tượng này là do các phân tử AMB xen vào lớp màng lipid kép và lấp đầy khoảng trống không gian giữa các phân tử phospholipd, làm cản trở quá trình quay chuyển dạng cấu trúc không gian của mạch hydrocarbon của phân tử phospholipid, khi đó lớp màng lipid kép tồn tại ở 1 trạng thái duy nhất trong suốt quá trình gia nhiệt, trạng thái này được gọi là trạng thái tinh thể lỏng sắp xếp một cách có trật tự Lo(ordered liquid - crystalline phase) [13]. Kết
quả cũng cho thấy khi có mặt AMB trên lớp màng lipid thì sự tồn tại trạng thái Lo
không phụ thuộc vào nồng độ cholesterol.
Do có sự tồn tại ở lớp màng lipid ở trạng thái Lo nên dù có tăng nhiệt độ lên 50 ºC trong quá trình đùn thì vẫn không làm cho lớp màng lipid linh động, mềm dẻo hơn để có thể thu được các hỗn dịch liposome có kích thước đồng nhất.