a. Điều kiện thử giải phóng
Qua quá trình khảo sát, tỷ lệ vitamin E giải phóng từ gel được xác định bằng hệ thống đánh giá giải phóng qua màng Hanson Research với các điều kiện như sau:
Màng giải phóng: màng cellulose acetat 0,2 µm (ngâm bão hòa môi trường giải phóng 20 phút trước khi thử); diện tích thử 1,767 cm2.
Khối lượng gel thử: chính xác khoảng 1,0000 g.
Thành phần môi trường, thể tích môi trường giải phóng cũng như nhiệt độ và tốc độ khuấy như trong mục 2.3.2.2 a.
b. Chuẩn bị mẫu chuẩn, cách thức tiến hành và xác định tỷ lệ vitamin E giải phóng từ gel
Mẫu chuẩn: được chuẩn bị như mục 2.3.2.2 b.
Cách thức tiến hành.
Tại thời điểm t = 0, cho gel vào ngăn cho. Lấy mẫu là môi trường giải phóng tại các thời điểm t = 0,5; 1; 2; 3; 4 và 5 giờ. Thể tích mỗi lần lấy là 1 ml. Quá trình lấy mẫu đồng thời cũng là quá trình thêm môi trường giải phóng vào ngăn nhận với thể tích bằng thể tích môi trường đã lấy ra. Mẫu môi trường lấy ra được đem pha
loãng 5 lần bằng dung môi thử giải phóng. Xác định lượng vitamin E giải phóng bằng phương pháp đo độ hấp thụ quang ở bước sóng 286 nm rồi đem so sánh với mẫu chuẩn.
Xác định phần trăm vitamin E giải phóng từ gel.
Sau t1 = 0,5 giờ, phần trăm vitamin E giải phóng từ gel tính theo công thức:
X1 (%) = (A1
Ac× Cc× 10
−6× 5 × 7) × 100
𝑚2× m× 100(%)
Sau tk giờ (k = 2, 3, 4, 5, 6) phần trăm vitamin E giải phóng từ gel tính theo:
Xk (%) = (Ak× 7 + ∑ Ai k−1 i=1 ) × Cc Ac× 10 −6× 5 × 100 𝑚2× m× 100(%) Trong đó:
+ Ac , Ak tương ứng là mật độ quang của dung dịch chuẩn và dung dịch môi trường thử tại thời điểm tk (k = 2, 3, 4, 5, 6).
+ Cc là nồng độ dung dịch chuẩn (µg/ml).
+ 5 là hệ số pha loãng của mẫu môi trường lấy được. + 7 là thể tích môi trường có trong ngăn nhận (ml). + m2 là khối lượng gel thử (g).
+ m là khối lượng vitamin E trong 100 g gel tính theo lý thuyết (g).
2.3.3.2. Định lượng nồng độ vitamin E trong gel
Định lượng vitamin E trong gel bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao.
a. Điều kiện sắc ký: như mục 2.3.2.3 a.
b. Chuẩn bị mẫu chuẩn và mẫu thử, xác định hàm lượng vitamin E .
Mẫu chuẩn được chuẩn bị như mục 2.3.2.3 b.
Mẫu thử: cân chính xác khoảng 1,0000 g gel chứa SLNs vitamin E. Phân tán trong khoảng 40 ml ethanol, đem siêu âm 15 phút để hòa tan hết các thành phần, rồi bổ sung ethanol vừa đủ 50 ml. Lọc qua màng 0,45 µm.
Xác định hàm lượng vitamin E bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Hàm lượng vitamin E (% ) có trong gel chứa hệ tiểu phân nano so với hàm lượng lý thuyết tính theo công thức sau:
𝐻 (%) = 𝑆𝑡
𝑆𝑐× 𝐶𝑐× 10
−6× 50 × 100
𝑚2× 𝑚× 100%
Trong đó:
+ Sc, St tương ứng là diện tích pic vitamin E của dung dịch chuẩn và dung dịch thử (mAU.s).
+ Cc là nồng độ dung dịch vitamin E chuẩn (µg/ml). + 50 là hệ số pha loãng của mẫu thử.
+ m2 là khối lượng gel đem định lượng (g).
