CHƯƠNG 3 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu
4.4.2 Xác định nhiệt độ thích hợp nhất cho quá trình lên men sinh tổng hợp protease từ A niger ở thời gian tối ưu (72 giờ)
Kết quả từ các thí nghiệm trên nhận thấy, quá trình lên men sinh tổng hợp protease từ A.
niger trên cơ chất bột đậu nành ở độ ẩm 55%, môi trường lên men ban đầu có pH = 5
với thời gian ủ 72 giờ là những thông số tối ưu nhằm tạo ra chế phẩm enzyme protease có hoạt tính cao nhất. Tuy nhiên, nhiệt độ một yếu tố cũng quan trọng và có ảnh hưởng rất lớn đến quá trình nuôi cấy và khả năng sinh enzyme của vi sinh vật. Trong cùng thời gian nuôi ủ tối ưu (72 giờ), ở các nhiệt độ khác nhau (28°c, 31°c, 34°c, 37°c ) sẽ thu được protease có hoạt tính khác nhau. Kết quả khảo sát được thể hiện ở hình 4.1.
Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 36 - 2013 Trường Đại học cần Thơ
0,160ậ 0,140 Ü 0,120 1 0,100 ậ 0,140 Ü 0,120 1 0,100
C 0.080 Ề 0.Û60 - 0,040
10,020
0,000
Hình 4.1: Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hoạt tính protease thu được từ quá trình lên men
Aspergillus niger
Kết quả ở hình 4.1 cho thấy, hoạt tính protease cao nhất khỉ nhiệt độ nuôi ủ Aspergillus niger S5 ở 31°c, hoạt tính thu được là 0,126 ± 0,012 u/g. Ở 28°c, hoạt tính thu được cũng khá cao (0,109 ± 0,010 u/g). Tuy nhiên, khi nhiệt độ càng tăng thì hoạt tính enzyme càng giảm (chỉ còn 0,078 ± 0,005 u/g ở 34°c và 0,073 ± 0,006 u/g ở 37°C). Điều này có thể giải thích do ở nhiệt độ cao, quá trình trao đổi chất và phát triển của vi sinh vật bị hạn chế (Haq et al, 2006); đồng thởỉ, enzyme protease bị biến tính và mất hoạt tính xúc tác do sự kéo dài và phá vỡ của các liên kết hydro trong cấu trúc của enzyme (Conn et al, 1987) dẫn dến hoạt tính protease giảm dần. Nghiên cứu của ỉkram et al (2006) trên dòng Pénicillium
chrysogenum cũng đã chứng tỏ rằng nhiệt độ thích hợp để sản xuất protease là 31 °c.
Kết quả thí nghiệm này cho thấy quá trình lên men rắn sinh tổng hợp protease từ nấm mốc thích hợp ở khoảng nhiệt độ ôn hòa, từ 28°c và 3 l°c. Tuy nhiên, nhiệt độ tấỉ thích và dễ thực hiện nhất sẽ là ờ 31 °c và thời gian ủ thích hợp giúp thu nhận hoạt tính protease cao nhất là 72 giờ.
Ữ.12 12
2 3